CAJ | 학술논문

旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与胚柄特异基因G564启动子顺式元件结合的转录因子.本研究根据植物胚柄特异表达基因G564启动子关键序列(GAAAAGCGAA)合成了5次串联重复序列,并与报告质粒pHIS2.1连接构建诱饵载体pHIS2.1-G564-5A；以纯化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼嫩种子mRNA为模板,合成SMARTTMⅢ和CDSⅢ锚定末端ds cDNA;并将ds cDNA与线性化融合表达载体pGADT7-Rec2以及诱饵载体pHIS2.1-G564-5A共转化到酵母Y187,构建酵母单杂交文库.文库的共转化效率为5.53×105cfu/μg.对文库中的阳性克隆进行测序,获得117条可读序列.对其进行基因功能注释并进一步分析基因的功能发现,具有DNA结合功能的蛋白14个,具有蛋白质结合功能的蛋白8个.上述22个蛋白包括TATA结合蛋白1 (TBP1),支架结构相关区(SAR)DNA-结合蛋白,胚珠发育蛋白,G- box结合因子1(GBF1),组蛋白H3等.本研究为分离和克隆胚柄中特异表达的转录因子提供了候选基因.
지재구건효모단잡교문고용우사선여배병특이기인G564계동자순식원건결합적전록인자.본연구근거식물배병특이표체기인G564계동자관건서렬(GAAAAGCGAA)합성료5차천련중복서렬,병여보고질립pHIS2.1련접구건유이재체pHIS2.1-G564-5A；이순화적의남개(Arabidopsis thaliana)유눈충자mRNA위모판,합성SMARTTMⅢ화CDSⅢ묘정말단ds cDNA;병장ds cDNA여선성화융합표체재체pGADT7-Rec2이급유이재체pHIS2.1-G564-5A공전화도효모Y187,구건효모단잡교문고.문고적공전화효솔위5.53×105cfu/μg.대문고중적양성극륭진행측서,획득117조가독서렬.대기진행기인공능주석병진일보분석기인적공능발현,구유DNA결합공능적단백14개,구유단백질결합공능적단백8개.상술22개단백포괄TATA결합단백1 (TBP1),지가결구상관구(SAR)DNA-결합단백,배주발육단백,G- box결합인자1(GBF1),조단백H3등.본연구위분리화극륭배병중특이표체적전록인자제공료후선기인.