国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2012年
9期
1025-1027
,共3页
刘利娅%李淑慧%严峻%胡川闽%余晓东
劉利婭%李淑慧%嚴峻%鬍川閩%餘曉東
류리아%리숙혜%엄준%호천민%여효동
猪呼吸与生殖综合征病毒%病毒非结构蛋白质类%原核细胞%基因表达%酶联免疫吸附测定%纯化
豬呼吸與生殖綜閤徵病毒%病毒非結構蛋白質類%原覈細胞%基因錶達%酶聯免疫吸附測定%純化
저호흡여생식종합정병독%병독비결구단백질류%원핵세포%기인표체%매련면역흡부측정%순화
目的 获得高纯度和高免疫原性的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒非结构蛋白7(nsp7).方法 nsp7编码DNA片段是PRRS病毒基因组裂解产物,酶切后连接至克隆质粒pET-28a构建为表达质粒pET-28a-nsp7,转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导蛋白表达,采用 Ni2+-NTA树脂纯化、Q阴离子交换层析、镍柱浓缩3个连续的过程进行纯化和用SDS-PAGE、Western blot、ELISA法进行鉴定.在此基础上通过间接ELISA法对135份血清样品进行检测,并与进口LSI-ELISA试剂盒进行比较.结果 SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量约为34×103,与理论值相一致;该蛋白产量高、可溶性好,纯度达95%;Western blot和间接ELISA法鉴定结果显示该重组蛋白能够与PRRS病毒的阳性血清反应,与进口LSI-ELISA试剂盒相比其符合率达91%.结论 成功构建了nsp7蛋白的表达与纯化系统,获得了高纯度和高免疫原性的nsp7蛋白,为PRRS血清学诊断奠定了基础.
目的 穫得高純度和高免疫原性的豬繁殖與呼吸綜閤徵(PRRS)病毒非結構蛋白7(nsp7).方法 nsp7編碼DNA片段是PRRS病毒基因組裂解產物,酶切後連接至剋隆質粒pET-28a構建為錶達質粒pET-28a-nsp7,轉化至大腸桿菌BL21中,IPTG誘導蛋白錶達,採用 Ni2+-NTA樹脂純化、Q陰離子交換層析、鎳柱濃縮3箇連續的過程進行純化和用SDS-PAGE、Western blot、ELISA法進行鑒定.在此基礎上通過間接ELISA法對135份血清樣品進行檢測,併與進口LSI-ELISA試劑盒進行比較.結果 SDS-PAGE分析錶明錶達產物的相對分子質量約為34×103,與理論值相一緻;該蛋白產量高、可溶性好,純度達95%;Western blot和間接ELISA法鑒定結果顯示該重組蛋白能夠與PRRS病毒的暘性血清反應,與進口LSI-ELISA試劑盒相比其符閤率達91%.結論 成功構建瞭nsp7蛋白的錶達與純化繫統,穫得瞭高純度和高免疫原性的nsp7蛋白,為PRRS血清學診斷奠定瞭基礎.
목적 획득고순도화고면역원성적저번식여호흡종합정(PRRS)병독비결구단백7(nsp7).방법 nsp7편마DNA편단시PRRS병독기인조렬해산물,매절후련접지극륭질립pET-28a구건위표체질립pET-28a-nsp7,전화지대장간균BL21중,IPTG유도단백표체,채용 Ni2+-NTA수지순화、Q음리자교환층석、얼주농축3개련속적과정진행순화화용SDS-PAGE、Western blot、ELISA법진행감정.재차기출상통과간접ELISA법대135빈혈청양품진행검측,병여진구LSI-ELISA시제합진행비교.결과 SDS-PAGE분석표명표체산물적상대분자질량약위34×103,여이론치상일치;해단백산량고、가용성호,순도체95%;Western blot화간접ELISA법감정결과현시해중조단백능구여PRRS병독적양성혈청반응,여진구LSI-ELISA시제합상비기부합솔체91%.결론 성공구건료nsp7단백적표체여순화계통,획득료고순도화고면역원성적nsp7단백,위PRRS혈청학진단전정료기출.
