中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
2期
45-48,56
,共5页
赵亚华%董竟南%崔红%白云%金科华%蒋智勇
趙亞華%董竟南%崔紅%白雲%金科華%蔣智勇
조아화%동경남%최홍%백운%금과화%장지용
蜂毒素%分子改造%毕赤酵母%基因表达%溶血活性
蜂毒素%分子改造%畢赤酵母%基因錶達%溶血活性
봉독소%분자개조%필적효모%기인표체%용혈활성
为获得保留有抗菌活性而降低溶血作用的蜂毒素,对蜂毒素的分子结构进行了改造.将第5位的Val变为Arg,第15位Ala变为Arg,删除了第16位的Leu.用PCR技术获得了改造后的蜂毒素基因,将其克隆入酵母表达载体pPICZa-A,获得重组表达质粒pPICZa-A-MEA.该质粒转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导下表达,发酵上清液经抑菌活性、溶血活性测定及亲和层析纯化,结果表明,蜂毒素基因成功地在毕赤酵母中表达,经改造后表达的蜂毒素保留了抗菌活性且溶血活性显著降低,经纯化后用Bradford法测定表达蜂毒素的含量约为0.29mg/ml.
為穫得保留有抗菌活性而降低溶血作用的蜂毒素,對蜂毒素的分子結構進行瞭改造.將第5位的Val變為Arg,第15位Ala變為Arg,刪除瞭第16位的Leu.用PCR技術穫得瞭改造後的蜂毒素基因,將其剋隆入酵母錶達載體pPICZa-A,穫得重組錶達質粒pPICZa-A-MEA.該質粒轉化畢赤酵母菌GS115,甲醇誘導下錶達,髮酵上清液經抑菌活性、溶血活性測定及親和層析純化,結果錶明,蜂毒素基因成功地在畢赤酵母中錶達,經改造後錶達的蜂毒素保留瞭抗菌活性且溶血活性顯著降低,經純化後用Bradford法測定錶達蜂毒素的含量約為0.29mg/ml.
위획득보류유항균활성이강저용혈작용적봉독소,대봉독소적분자결구진행료개조.장제5위적Val변위Arg,제15위Ala변위Arg,산제료제16위적Leu.용PCR기술획득료개조후적봉독소기인,장기극륭입효모표체재체pPICZa-A,획득중조표체질립pPICZa-A-MEA.해질립전화필적효모균GS115,갑순유도하표체,발효상청액경억균활성、용혈활성측정급친화층석순화,결과표명,봉독소기인성공지재필적효모중표체,경개조후표체적봉독소보류료항균활성차용혈활성현저강저,경순화후용Bradford법측정표체봉독소적함량약위0.29mg/ml.
