CAJ | 학술논문

目的:探讨体外培养与分离SD乳鼠神经干细胞的方法,以便获得大量的神经干细胞.方法:实验于2003-06/10在四川大学华西医学中心细胞生物学教研室完成.分别取出生3 d的SD乳鼠侧脑室和大脑皮质,用改进后的胰蛋白酶消化法分离单个细胞,进行细胞培养,加20μg/L表皮生长因子,20μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激生长,用半定量法换培养液,用免疫细胞化学方法对神经干细胞进行鉴定,流式细胞仪分别对每天培养的神经干细胞凋亡率进行检测.结果:①所获得的克隆细胞具有抗巢蛋白免疫荧光反应阳性、具有增殖、血清诱导分化的特性,证明这些细胞为神经干细胞.②培养的侧脑室神经干细胞比大脑皮质的神经干细胞增殖快.③改进的胰蛋白酶消化法得到了1×108 L-1单细胞,避免了过度消化或过度机械吹打造成的细胞碎片.④含20μg/L表皮生长因子和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养基适合神经干细胞短期培养.⑤流式细胞仪定量检测细胞凋亡率呈下降趋势.结论:SD乳鼠体外培养神经干细胞取材最佳位置应该是脑室管膜或室管膜下.神经干细胞的存活和分裂有赖于表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子按一定比例的共同作用.采用改进的胰酶消化法提高有效细胞产生率,应用半定量换液法可有效减少细胞凋亡率.
목적:탐토체외배양여분리SD유서신경간세포적방법,이편획득대량적신경간세포.방법:실험우2003-06/10재사천대학화서의학중심세포생물학교연실완성.분별취출생3 d적SD유서측뇌실화대뇌피질,용개진후적이단백매소화법분리단개세포,진행세포배양,가20μg/L표피생장인자,20μg/L감성성섬유세포생장인자자격생장,용반정량법환배양액,용면역세포화학방법대신경간세포진행감정,류식세포의분별대매천배양적신경간세포조망솔진행검측.결과:①소획득적극륭세포구유항소단백면역형광반응양성、구유증식、혈청유도분화적특성,증명저사세포위신경간세포.②배양적측뇌실신경간세포비대뇌피질적신경간세포증식쾌.③개진적이단백매소화법득도료1×108 L-1단세포,피면료과도소화혹과도궤계취타조성적세포쇄편.④함20μg/L표피생장인자화20μg/L감성성섬유세포생장인자배양기괄합신경간세포단기배양.⑤류식세포의정량검측세포조망솔정하강추세.결론:SD유서체외배양신경간세포취재최가위치응해시뇌실관막혹실관막하.신경간세포적존활화분렬유뢰우표피생장인자화감성성섬유세포생장인자안일정비례적공동작용.채용개진적이매소화법제고유효세포산생솔,응용반정량환액법가유효감소세포조망솔.