CAJ | 학술논문

目的:众多研究已证实骨髓基质细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤是有效的,但移植时间点的选择尚无定论.在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间点进行骨髓基质细胞移植,通过对其远期行为学及组织学检测,探讨最佳的移植时间窗.方法:实验于2005-06/2006-06在中南大学湘雅医院中心实验室完成.①动物:选取清洁级7 d龄SD大鼠50只,随机数字表法分为5组:正常对照组、模型对照组、24 h,72 h,7 d细胞移植组,10只/组.另取4周龄SD大鼠10只用于骨髓基质细胞的培养.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:除正常对照组外,其余组大鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型.在脑立体定位仪下,24 h,72 h,7 d细胞移植组分别于造模后对应时间点,将体外培养3~5代且经Hochest33324标记24 h的鼠骨髓基质细胞2 μL脑内移植于左侧海马,约105个细胞.③实验评估:各组大鼠40 d日龄时进行迷宫觅水测试,记录觅水时间、错误次数、重复次数.行为学测试后取脑组织片行尼氏染色,计数左侧海马CA1区神经元数.在荧光显微镜下观察骨髓基质细胞的存活、增殖,用免疫组化法检测骨髓基质细胞神经元特异性烯醇化酶的阳性率.结果:50只大鼠均进入结果分析.①放射臂迷宫实验检测:模型对照组觅水时间、错误次数、重复次数均高于正常对照组和各细胞移植组（P < 0.01）,24 h细胞移植组上述3项指标均低于72 h,7 d细胞移植组（P < 0.05）.②左侧海马CA1区神经元尼氏染色结果:模型对照组神经元数较正常对照组明显减少（P < 0.01）,且排列紊乱,丢失明显;24 h,72 h,7 d细胞移植组神经元数均较模型对照组显著增加（P < 0.01）,排列整齐;24 h细胞移植组神经元数较72 h,7 d细胞移植组明显增多（P < 0.05）.③骨髓基质细胞体内增殖和神经分化情况:骨髓基质细胞移植后30~40 d仍可在移植部位及左侧皮质区存活、增殖.24 h细胞移植组左脑神经元特异性烯醇化酶阳性表达率显著高于72 h,7 d细胞移植组（P < 0.01）.结论:新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后24 h接受骨髓基质细胞移植可最大程度改善脑损伤所导致的远期行为学障碍,其机制可能与早期移植可有效减轻神经元的坏死、凋亡,且有利于骨髓基质细胞的迁移、分化有关. 目的:衆多研究已證實骨髓基質細胞移植治療缺氧缺血性腦損傷是有效的,但移植時間點的選擇尚無定論.在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷後不同時間點進行骨髓基質細胞移植,通過對其遠期行為學及組織學檢測,探討最佳的移植時間窗.方法:實驗于2005-06/2006-06在中南大學湘雅醫院中心實驗室完成.①動物:選取清潔級7 d齡SD大鼠50隻,隨機數字錶法分為5組:正常對照組、模型對照組、24 h,72 h,7 d細胞移植組,10隻/組.另取4週齡SD大鼠10隻用于骨髓基質細胞的培養.實驗過程中對動物的處置符閤動物倫理學標準.②實驗方法:除正常對照組外,其餘組大鼠均建立缺氧缺血性腦損傷模型.在腦立體定位儀下,24 h,72 h,7 d細胞移植組分彆于造模後對應時間點,將體外培養3~5代且經Hochest33324標記24 h的鼠骨髓基質細胞2 μL腦內移植于左側海馬,約105箇細胞.③實驗評估:各組大鼠40 d日齡時進行迷宮覓水測試,記錄覓水時間、錯誤次數、重複次數.行為學測試後取腦組織片行尼氏染色,計數左側海馬CA1區神經元數.在熒光顯微鏡下觀察骨髓基質細胞的存活、增殖,用免疫組化法檢測骨髓基質細胞神經元特異性烯醇化酶的暘性率.結果:50隻大鼠均進入結果分析.①放射臂迷宮實驗檢測:模型對照組覓水時間、錯誤次數、重複次數均高于正常對照組和各細胞移植組（P < 0.01）,24 h細胞移植組上述3項指標均低于72 h,7 d細胞移植組（P < 0.05）.②左側海馬CA1區神經元尼氏染色結果:模型對照組神經元數較正常對照組明顯減少（P < 0.01）,且排列紊亂,丟失明顯;24 h,72 h,7 d細胞移植組神經元數均較模型對照組顯著增加（P < 0.01）,排列整齊;24 h細胞移植組神經元數較72 h,7 d細胞移植組明顯增多（P < 0.05）.③骨髓基質細胞體內增殖和神經分化情況:骨髓基質細胞移植後30~40 d仍可在移植部位及左側皮質區存活、增殖.24 h細胞移植組左腦神經元特異性烯醇化酶暘性錶達率顯著高于72 h,7 d細胞移植組（P < 0.01）.結論:新生大鼠缺氧缺血性腦損傷後24 h接受骨髓基質細胞移植可最大程度改善腦損傷所導緻的遠期行為學障礙,其機製可能與早期移植可有效減輕神經元的壞死、凋亡,且有利于骨髓基質細胞的遷移、分化有關.
목적:음다연구이증실골수기질세포이식치료결양결혈성뇌손상시유효적,단이식시간점적선택상무정론.재신생대서결양결혈성뇌손상후불동시간점진행골수기질세포이식,통과대기원기행위학급조직학검측,탐토최가적이식시간창.방법:실험우2005-06/2006-06재중남대학상아의원중심실험실완성.①동물:선취청길급7 d령SD대서50지,수궤수자표법분위5조:정상대조조、모형대조조、24 h,72 h,7 d세포이식조,10지/조.령취4주령SD대서10지용우골수기질세포적배양.실험과정중대동물적처치부합동물윤리학표준.②실험방법:제정상대조조외,기여조대서균건립결양결혈성뇌손상모형.재뇌입체정위의하,24 h,72 h,7 d세포이식조분별우조모후대응시간점,장체외배양3~5대차경Hochest33324표기24 h적서골수기질세포2 μL뇌내이식우좌측해마,약105개세포.③실험평고:각조대서40 d일령시진행미궁멱수측시,기록멱수시간、착오차수、중복차수.행위학측시후취뇌조직편행니씨염색,계수좌측해마CA1구신경원수.재형광현미경하관찰골수기질세포적존활、증식,용면역조화법검측골수기질세포신경원특이성희순화매적양성솔.결과:50지대서균진입결과분석.①방사비미궁실험검측:모형대조조멱수시간、착오차수、중복차수균고우정상대조조화각세포이식조（P < 0.01）,24 h세포이식조상술3항지표균저우72 h,7 d세포이식조（P < 0.05）.②좌측해마CA1구신경원니씨염색결과:모형대조조신경원수교정상대조조명현감소（P < 0.01）,차배렬문란,주실명현;24 h,72 h,7 d세포이식조신경원수균교모형대조조현저증가（P < 0.01）,배렬정제;24 h세포이식조신경원수교72 h,7 d세포이식조명현증다（P < 0.05）.③골수기질세포체내증식화신경분화정황:골수기질세포이식후30~40 d잉가재이식부위급좌측피질구존활、증식.24 h세포이식조좌뇌신경원특이성희순화매양성표체솔현저고우72 h,7 d세포이식조（P < 0.01）.결론:신생대서결양결혈성뇌손상후24 h접수골수기질세포이식가최대정도개선뇌손상소도치적원기행위학장애,기궤제가능여조기이식가유효감경신경원적배사、조망,차유리우골수기질세포적천이、분화유관.