世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2008年
11期
1173-1178
,共6页
HDAC1基因%短发卡状RN&大肠癌%凋亡%增殖%逆转录聚合酶链反应
HDAC1基因%短髮卡狀RN&大腸癌%凋亡%增殖%逆轉錄聚閤酶鏈反應
HDAC1기인%단발잡상RN&대장암%조망%증식%역전록취합매련반응
目的:研究下调HDAC1的表达对大肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:设计合成HDAC1的特异性shRNA,将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染SW480细胞株.用RT-PCR和Western blot检测shRNA对细胞内HDAC1基因表达的影响,同时采用Western blot对细胞周期相关基因进行检测.采用MTT法检测生长抑制作用.运用流式细胞术检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布.结果:成功构建和筛选出HDAC1特异性的shRNA质粒载体,与空白对照组相比,转染HDAC1-shRNA的大肠癌细胞HDAC1 mRNA蛋白质表达水平明显下降(30.4%±4.5% vs 64.6%±4.4%,P<0.01;27.4%±4.5% vs 58.1%±3.3%,P<0.0 1),p21/WAF-1/CIP-1表达增加(97.4%±2.6% vs 62.6%±3.4%,P<0.01),CdK2和Cyclin E蛋白下降(CdK2:27.7%±6.0% vs 42.6%±4.1%,P<0.01;Cyclin E:42.0%±8.5% vs 82.8%±3.7%,P<0.01),细胞生长抑制率增加(24 h:35.9%±4.9% vs 1.2%±0.6%,P<0.01;48h:47.5%±7.0% vs 1.3%±0.6%,P<0.01;72h:45.7%±6.2% vs 1.0%±0.5%,P<0.01;96h:48.2%±4.7% vs 1.2%±0.7%,P<0.01),凋亡率明显增加(31.3%±2.8% vs 3.9%4±0.7%,P<0.01),G0/G1期和G2/M期细胞比例增加(G0/G1:64.5%±0.9% vs 57.8%±1.8%,P<0.01;G2/M:17.4%±1.3% vs 14.5%±0.6%,P<0.05),S期细胞比例相应下降(17.5%±1.0% vs 27.7%±1.5%.P<0.01).结论:HDAC1特异的shRNA能够有效下调HDAC1基因,诱导大肠癌细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖.
目的:研究下調HDAC1的錶達對大腸癌細胞增殖、凋亡和細胞週期的影響.方法:設計閤成HDAC1的特異性shRNA,將其插入至pSilencer載體中,併將重組後的pSilencer質粒載體經脂質體包裹轉染SW480細胞株.用RT-PCR和Western blot檢測shRNA對細胞內HDAC1基因錶達的影響,同時採用Western blot對細胞週期相關基因進行檢測.採用MTT法檢測生長抑製作用.運用流式細胞術檢測細胞的凋亡情況和細胞週期分佈.結果:成功構建和篩選齣HDAC1特異性的shRNA質粒載體,與空白對照組相比,轉染HDAC1-shRNA的大腸癌細胞HDAC1 mRNA蛋白質錶達水平明顯下降(30.4%±4.5% vs 64.6%±4.4%,P<0.01;27.4%±4.5% vs 58.1%±3.3%,P<0.0 1),p21/WAF-1/CIP-1錶達增加(97.4%±2.6% vs 62.6%±3.4%,P<0.01),CdK2和Cyclin E蛋白下降(CdK2:27.7%±6.0% vs 42.6%±4.1%,P<0.01;Cyclin E:42.0%±8.5% vs 82.8%±3.7%,P<0.01),細胞生長抑製率增加(24 h:35.9%±4.9% vs 1.2%±0.6%,P<0.01;48h:47.5%±7.0% vs 1.3%±0.6%,P<0.01;72h:45.7%±6.2% vs 1.0%±0.5%,P<0.01;96h:48.2%±4.7% vs 1.2%±0.7%,P<0.01),凋亡率明顯增加(31.3%±2.8% vs 3.9%4±0.7%,P<0.01),G0/G1期和G2/M期細胞比例增加(G0/G1:64.5%±0.9% vs 57.8%±1.8%,P<0.01;G2/M:17.4%±1.3% vs 14.5%±0.6%,P<0.05),S期細胞比例相應下降(17.5%±1.0% vs 27.7%±1.5%.P<0.01).結論:HDAC1特異的shRNA能夠有效下調HDAC1基因,誘導大腸癌細胞髮生凋亡和細胞週期阻滯,從而抑製細胞的增殖.
목적:연구하조HDAC1적표체대대장암세포증식、조망화세포주기적영향.방법:설계합성HDAC1적특이성shRNA,장기삽입지pSilencer재체중,병장중조후적pSilencer질립재체경지질체포과전염SW480세포주.용RT-PCR화Western blot검측shRNA대세포내HDAC1기인표체적영향,동시채용Western blot대세포주기상관기인진행검측.채용MTT법검측생장억제작용.운용류식세포술검측세포적조망정황화세포주기분포.결과:성공구건화사선출HDAC1특이성적shRNA질립재체,여공백대조조상비,전염HDAC1-shRNA적대장암세포HDAC1 mRNA단백질표체수평명현하강(30.4%±4.5% vs 64.6%±4.4%,P<0.01;27.4%±4.5% vs 58.1%±3.3%,P<0.0 1),p21/WAF-1/CIP-1표체증가(97.4%±2.6% vs 62.6%±3.4%,P<0.01),CdK2화Cyclin E단백하강(CdK2:27.7%±6.0% vs 42.6%±4.1%,P<0.01;Cyclin E:42.0%±8.5% vs 82.8%±3.7%,P<0.01),세포생장억제솔증가(24 h:35.9%±4.9% vs 1.2%±0.6%,P<0.01;48h:47.5%±7.0% vs 1.3%±0.6%,P<0.01;72h:45.7%±6.2% vs 1.0%±0.5%,P<0.01;96h:48.2%±4.7% vs 1.2%±0.7%,P<0.01),조망솔명현증가(31.3%±2.8% vs 3.9%4±0.7%,P<0.01),G0/G1기화G2/M기세포비례증가(G0/G1:64.5%±0.9% vs 57.8%±1.8%,P<0.01;G2/M:17.4%±1.3% vs 14.5%±0.6%,P<0.05),S기세포비례상응하강(17.5%±1.0% vs 27.7%±1.5%.P<0.01).결론:HDAC1특이적shRNA능구유효하조HDAC1기인,유도대장암세포발생조망화세포주기조체,종이억제세포적증식.
