重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2009年
4期
382-385
,共4页
李宜成%何勇虹%彭志红%汪荣泉
李宜成%何勇虹%彭誌紅%汪榮泉
리의성%하용홍%팽지홍%왕영천
黏蛋白rMuc3%酶切%基序%定点突变%转染%SEA组件
黏蛋白rMuc3%酶切%基序%定點突變%轉染%SEA組件
점단백rMuc3%매절%기서%정점돌변%전염%SEA조건
目的 探讨大鼠黏蛋白rMuc3酶切保守基序LS1KGS2IV1V2中各氨基酸对其蛋白酶切的影响.方法 采用定点突变技术,设计相应突变引物,以p20为模板,基于PCR扩增得到突变体,并经测序验证.然后通过Western Blot检测各突变体的表达,并分析未酶切部分所占比例.结果 细胞裂解物经Western Blot免疫印迹实验,证实在55kd处存在未酶切的部分,在30kd处存在可被抗V5抗体检测的N端部分,经过Quantity one分析后发现,S2/A完全抑制了酶切的发生,G/A抑制了绝大部分的酶切(未酶切部分占79%),L/A、I/A、V1/A、V2/A均对酶切产生了不同程度的抑制,未酶切部分分别为22%、39%、14%和17%,而K/A和S2/A几乎对酶切没有影响,其未酶切部分分别为6%和3%,酶切效率与p20(未酶切部分占4%)几乎一样.结论 酶切保守基序LS1KGS2IV1V2中各氨基酸对其蛋白酶切的发生是很重要的,其机制可能是因为此保守基序位于β2和β3片层之间的环状区,其上的氨基酸对于维持黏蛋白的构象是必须的.在S1上可能有O型糖链的存在,并且去除此O型糖链不影响酶切保守基序LS1KGS2IV1V2的酶切.
目的 探討大鼠黏蛋白rMuc3酶切保守基序LS1KGS2IV1V2中各氨基痠對其蛋白酶切的影響.方法 採用定點突變技術,設計相應突變引物,以p20為模闆,基于PCR擴增得到突變體,併經測序驗證.然後通過Western Blot檢測各突變體的錶達,併分析未酶切部分所佔比例.結果 細胞裂解物經Western Blot免疫印跡實驗,證實在55kd處存在未酶切的部分,在30kd處存在可被抗V5抗體檢測的N耑部分,經過Quantity one分析後髮現,S2/A完全抑製瞭酶切的髮生,G/A抑製瞭絕大部分的酶切(未酶切部分佔79%),L/A、I/A、V1/A、V2/A均對酶切產生瞭不同程度的抑製,未酶切部分分彆為22%、39%、14%和17%,而K/A和S2/A幾乎對酶切沒有影響,其未酶切部分分彆為6%和3%,酶切效率與p20(未酶切部分佔4%)幾乎一樣.結論 酶切保守基序LS1KGS2IV1V2中各氨基痠對其蛋白酶切的髮生是很重要的,其機製可能是因為此保守基序位于β2和β3片層之間的環狀區,其上的氨基痠對于維持黏蛋白的構象是必鬚的.在S1上可能有O型糖鏈的存在,併且去除此O型糖鏈不影響酶切保守基序LS1KGS2IV1V2的酶切.
목적 탐토대서점단백rMuc3매절보수기서LS1KGS2IV1V2중각안기산대기단백매절적영향.방법 채용정점돌변기술,설계상응돌변인물,이p20위모판,기우PCR확증득도돌변체,병경측서험증.연후통과Western Blot검측각돌변체적표체,병분석미매절부분소점비례.결과 세포렬해물경Western Blot면역인적실험,증실재55kd처존재미매절적부분,재30kd처존재가피항V5항체검측적N단부분,경과Quantity one분석후발현,S2/A완전억제료매절적발생,G/A억제료절대부분적매절(미매절부분점79%),L/A、I/A、V1/A、V2/A균대매절산생료불동정도적억제,미매절부분분별위22%、39%、14%화17%,이K/A화S2/A궤호대매절몰유영향,기미매절부분분별위6%화3%,매절효솔여p20(미매절부분점4%)궤호일양.결론 매절보수기서LS1KGS2IV1V2중각안기산대기단백매절적발생시흔중요적,기궤제가능시인위차보수기서위우β2화β3편층지간적배상구,기상적안기산대우유지점단백적구상시필수적.재S1상가능유O형당련적존재,병차거제차O형당련불영향매절보수기서LS1KGS2IV1V2적매절.
