CAJ | 학술논문

目的:通过精原干细胞体外转染外源基因获得转基因精子.方法:孵化16 d的鸡胚睾丸,酶消化获取精原干细胞(SSCs),纯化后体外培养和传代扩增,碱性磷酸酶(AKP)活性和胚胎阶段特异性抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定.电穿孔介导EGFP转染SSCs,G418筛选8 d后将阳性SSCs移植入经白消安处理的实验鸡体内.结果:移植后25 d采集实验鸡精液检测,精子密度为3.87(10~(10)/L),表达EGFP的成熟精子比率为4.25%;移植后85 d,精子密度为3.27(10~(11)/L),表达EGFP的成熟精子比率为16.25%.睾丸组织冰冻切片显示,曲精细管中转染后的SSCs定居在曲精细管的基底部,有表达EGFP蛋白生精细胞.收集实验鸡精液,提取DNA进行PCR扩增EGFP基因,经凝胶电泳检测,精液DNA的条带清晰,与目的片段大小一致.结论:鸡胚精原干细胞体外转染EGFP可获得转基因精子,为进一步生产转基因模型动物拓宽了途径.
목적:통과정원간세포체외전염외원기인획득전기인정자.방법:부화16 d적계배고환,매소화획취정원간세포(SSCs),순화후체외배양화전대확증,감성린산매(AKP)활성화배태계단특이성항원(SSEA-1)면역형광감정.전천공개도EGFP전염SSCs,G418사선8 d후장양성SSCs이식입경백소안처리적실험계체내.결과:이식후25 d채집실험계정액검측,정자밀도위3.87(10~(10)/L),표체EGFP적성숙정자비솔위4.25%;이식후85 d,정자밀도위3.27(10~(11)/L),표체EGFP적성숙정자비솔위16.25%.고환조직빙동절편현시,곡정세관중전염후적SSCs정거재곡정세관적기저부,유표체EGFP단백생정세포.수집실험계정액,제취DNA진행PCR확증EGFP기인,경응효전영검측,정액DNA적조대청석,여목적편단대소일치.결론:계배정원간세포체외전염EGFP가획득전기인정자,위진일보생산전기인모형동물탁관료도경.