中医正骨
中醫正骨
중의정골
THE JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE ORTHOPEDICS AND TRAUMATOLOGY
2012年
7期
3-7
,共5页
叶蕻芝%李西海%陈加守%郑春松%杨建萍%翁霞萍%曾宗鹏%郑志%刘献祥
葉蕻芝%李西海%陳加守%鄭春鬆%楊建萍%翁霞萍%曾宗鵬%鄭誌%劉獻祥
협홍지%리서해%진가수%정춘송%양건평%옹하평%증종붕%정지%류헌상
骨关节炎%透骨消痛胶囊%细胞周期蛋白D1%软骨细胞%含药血清
骨關節炎%透骨消痛膠囊%細胞週期蛋白D1%軟骨細胞%含藥血清
골관절염%투골소통효낭%세포주기단백D1%연골세포%함약혈청
目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的可能作用机制.方法:采用抽签法将16只12周龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组4只.低剂量组按5 mL·kg-体质量以5 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,中剂量组按5 mL·kg-体质量以10 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,高剂量组按5 mL·kg-1体质量以20 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,空白组按5 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃.每天灌胃2次,连续7d,最后1d连续2次灌胃,中间间隔2h.末次灌胃后3h提取各组实验兔含药血清低温保存备用.将6只4周龄雄性新西兰兔处死,取其膝关节软骨,置入盛有Ⅱ型胶原酶的培养皿中进行消化,建立软骨细胞体外培养体系,并采用甲苯胺蓝染色法鉴定细胞功能.将体外培养的第3代软骨细胞随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,并分别加入含空白血清、低剂量中药血清、中剂量中药血清、高剂量中药血清的DMEM培养液中继续培养72 h后,采用MTT法检测软骨细胞的增殖情况,采用RT - PCR法检测CyclinD1 mRNA的表达,并在透射电子显微镜下观察细胞形态.结果:Ⅱ型胶原酶消化法成功建立了软骨细胞的体外培养体系,甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒.干预72 h后,各组软骨细胞光密度值比较,差异有统计学意义(F=6.209,P=0.004)；中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于空白组(P=0.005,P=0.002)；中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于低剂量组(P =0.034,P=0.011).各组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=8.262,P=0.001)；中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于空白组(P=0.002,P=0.001)；中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于低剂量组(P =0.012,P=0.004)；中剂量组、高剂量组可见较多处于分裂期的细胞.结论:透骨消痛胶囊的含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA的表达,从而促进软骨细胞增殖,这可能是透骨消痛胶囊在临床上治疗骨性关节炎具有较好疗效的部分机理,而有关透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的具体作用机制还需作更进一步的深入研究,以便为临床应用提供理论依据.
目的:觀察透骨消痛膠囊含藥血清對軟骨細胞CyclinD1 mRNA錶達的影響,探討透骨消痛膠囊治療骨性關節炎的可能作用機製.方法:採用抽籤法將16隻12週齡雄性新西蘭大白兔隨機分為空白組、低劑量組、中劑量組、高劑量組,每組4隻.低劑量組按5 mL·kg-體質量以5 mg·mL-1透骨消痛膠囊溶液灌胃,中劑量組按5 mL·kg-體質量以10 mg·mL-1透骨消痛膠囊溶液灌胃,高劑量組按5 mL·kg-1體質量以20 mg·mL-1透骨消痛膠囊溶液灌胃,空白組按5 mL·kg-1體質量以生理鹽水灌胃.每天灌胃2次,連續7d,最後1d連續2次灌胃,中間間隔2h.末次灌胃後3h提取各組實驗兔含藥血清低溫保存備用.將6隻4週齡雄性新西蘭兔處死,取其膝關節軟骨,置入盛有Ⅱ型膠原酶的培養皿中進行消化,建立軟骨細胞體外培養體繫,併採用甲苯胺藍染色法鑒定細胞功能.將體外培養的第3代軟骨細胞隨機分為空白組、低劑量組、中劑量組、高劑量組,併分彆加入含空白血清、低劑量中藥血清、中劑量中藥血清、高劑量中藥血清的DMEM培養液中繼續培養72 h後,採用MTT法檢測軟骨細胞的增殖情況,採用RT - PCR法檢測CyclinD1 mRNA的錶達,併在透射電子顯微鏡下觀察細胞形態.結果:Ⅱ型膠原酶消化法成功建立瞭軟骨細胞的體外培養體繫,甲苯胺藍染色可見軟骨細胞內呈紫紅色異染顆粒.榦預72 h後,各組軟骨細胞光密度值比較,差異有統計學意義(F=6.209,P=0.004)；中劑量組、高劑量組軟骨細胞光密度值高于空白組(P=0.005,P=0.002)；中劑量組、高劑量組軟骨細胞光密度值高于低劑量組(P =0.034,P=0.011).各組軟骨細胞CyclinD1 mRNA錶達量比較,差異有統計學意義(F=8.262,P=0.001)；中劑量組、高劑量組軟骨細胞CyclinD1 mRNA錶達量高于空白組(P=0.002,P=0.001)；中劑量組、高劑量組軟骨細胞CyclinD1 mRNA錶達量高于低劑量組(P =0.012,P=0.004)；中劑量組、高劑量組可見較多處于分裂期的細胞.結論:透骨消痛膠囊的含藥血清能促進軟骨細胞G1期正性調節因子CyclinD1 mRNA的錶達,從而促進軟骨細胞增殖,這可能是透骨消痛膠囊在臨床上治療骨性關節炎具有較好療效的部分機理,而有關透骨消痛膠囊治療骨性關節炎的具體作用機製還需作更進一步的深入研究,以便為臨床應用提供理論依據.
목적:관찰투골소통효낭함약혈청대연골세포CyclinD1 mRNA표체적영향,탐토투골소통효낭치료골성관절염적가능작용궤제.방법:채용추첨법장16지12주령웅성신서란대백토수궤분위공백조、저제량조、중제량조、고제량조,매조4지.저제량조안5 mL·kg-체질량이5 mg·mL-1투골소통효낭용액관위,중제량조안5 mL·kg-체질량이10 mg·mL-1투골소통효낭용액관위,고제량조안5 mL·kg-1체질량이20 mg·mL-1투골소통효낭용액관위,공백조안5 mL·kg-1체질량이생리염수관위.매천관위2차,련속7d,최후1d련속2차관위,중간간격2h.말차관위후3h제취각조실험토함약혈청저온보존비용.장6지4주령웅성신서란토처사,취기슬관절연골,치입성유Ⅱ형효원매적배양명중진행소화,건립연골세포체외배양체계,병채용갑분알람염색법감정세포공능.장체외배양적제3대연골세포수궤분위공백조、저제량조、중제량조、고제량조,병분별가입함공백혈청、저제량중약혈청、중제량중약혈청、고제량중약혈청적DMEM배양액중계속배양72 h후,채용MTT법검측연골세포적증식정황,채용RT - PCR법검측CyclinD1 mRNA적표체,병재투사전자현미경하관찰세포형태.결과:Ⅱ형효원매소화법성공건립료연골세포적체외배양체계,갑분알람염색가견연골세포내정자홍색이염과립.간예72 h후,각조연골세포광밀도치비교,차이유통계학의의(F=6.209,P=0.004)；중제량조、고제량조연골세포광밀도치고우공백조(P=0.005,P=0.002)；중제량조、고제량조연골세포광밀도치고우저제량조(P =0.034,P=0.011).각조연골세포CyclinD1 mRNA표체량비교,차이유통계학의의(F=8.262,P=0.001)；중제량조、고제량조연골세포CyclinD1 mRNA표체량고우공백조(P=0.002,P=0.001)；중제량조、고제량조연골세포CyclinD1 mRNA표체량고우저제량조(P =0.012,P=0.004)；중제량조、고제량조가견교다처우분렬기적세포.결론:투골소통효낭적함약혈청능촉진연골세포G1기정성조절인자CyclinD1 mRNA적표체,종이촉진연골세포증식,저가능시투골소통효낭재림상상치료골성관절염구유교호료효적부분궤리,이유관투골소통효낭치료골성관절염적구체작용궤제환수작경진일보적심입연구,이편위림상응용제공이론의거.
