CAJ | 학술논문

应用PCR方法扩增出HCVE2基因编码417a.a～750a.a的DNA片段,克隆到原核表达载体pQE30 LacZ启动子下游,转化JM109菌株.在JM109菌株中诱导表达出N端含6个组氨酸的E2融合蛋白,用Ni-NTA-Superflow亲和层析柱纯化作为抗原免疫实验兔和BALB/c鼠.定期取免血,采用间接ELISA方法检测兔子体内针对E2的抗体水平和维持规律.结果显示,距初次免疫14d兔子体内已有抗体产生,直至免疫第55d抗体水平持续上升,之后抗体水平保持稳定,抗体滴度达到1:3200.六周后,取鼠脾脏制备淋巴细胞,定向刺激扩增后与经过重组真核表达质粒pCE2转染的P815细胞作用,利用LDH释放试验检测作用效果.在E:T=200:1的情况下,杀伤率超过30%.这些结果表明工程菌株表达的HCV E2蛋白具有良好的免疫原性,可以诱发免疫实验动物机体产生较高滴度的抗体及特异性CTL应答.由此我们认为E2蛋白是发展HCV预防工程蛋白疫苗的合适候选者.
응용PCR방법확증출HCVE2기인편마417a.a～750a.a적DNA편단,극륭도원핵표체재체pQE30 LacZ계동자하유,전화JM109균주.재JM109균주중유도표체출N단함6개조안산적E2융합단백,용Ni-NTA-Superflow친화층석주순화작위항원면역실험토화BALB/c서.정기취면혈,채용간접ELISA방법검측토자체내침대E2적항체수평화유지규률.결과현시,거초차면역14d토자체내이유항체산생,직지면역제55d항체수평지속상승,지후항체수평보지은정,항체적도체도1:3200.륙주후,취서비장제비림파세포,정향자격확증후여경과중조진핵표체질립pCE2전염적P815세포작용,이용LDH석방시험검측작용효과.재E:T=200:1적정황하,살상솔초과30%.저사결과표명공정균주표체적HCV E2단백구유량호적면역원성,가이유발면역실험동물궤체산생교고적도적항체급특이성CTL응답.유차아문인위E2단백시발전HCV예방공정단백역묘적합괄후선자.