第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2005年
17期
1614-1617
,共4页
郭寿贵%吴平生%王月刚%傅锐斌
郭壽貴%吳平生%王月剛%傅銳斌
곽수귀%오평생%왕월강%부예빈
低氧诱导因子1α%突变%腺病毒%基因治疗
低氧誘導因子1α%突變%腺病毒%基因治療
저양유도인자1α%돌변%선병독%기인치료
目的: 构建人突变型低氧诱导因子1(HIF-1)α腺病毒表达载体,研究人突变型HIF-1α基因对冠心病的血管新生作用. 方法: 采用分子克隆技术,由pcDNA3.1(+)-HIF1α(突变型)质粒获得突变型HIF1α cDNA,克隆到穿梭质粒pShuttle2,以PI-Sce I和I-Ceu I双酶切重组穿梭质粒,获得含有突变型HIF1α cDNA的表达盒,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-X Viral DNA连接,重组成pAdeno-HIF1α腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,在HEK293细胞中包装成为重组Adeno-HIF1α腺病毒,并进行PCR鉴定及滴度测定. 结果: 经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,包装后冻融细胞的上清PCR检测重组腺病毒包装成功,病毒滴度为2×1012 pfu/L. 结论: 成功构建重组腺病毒Adeno-HIF1α(突变型),为冠心病的突变型HIF1α基因治疗研究奠定基础.
目的: 構建人突變型低氧誘導因子1(HIF-1)α腺病毒錶達載體,研究人突變型HIF-1α基因對冠心病的血管新生作用. 方法: 採用分子剋隆技術,由pcDNA3.1(+)-HIF1α(突變型)質粒穫得突變型HIF1α cDNA,剋隆到穿梭質粒pShuttle2,以PI-Sce I和I-Ceu I雙酶切重組穿梭質粒,穫得含有突變型HIF1α cDNA的錶達盒,通過體外連接法與線性化的腺病毒骨架質粒Adeno-X Viral DNA連接,重組成pAdeno-HIF1α腺病毒質粒,經酶切及測序鑒定正確後,在HEK293細胞中包裝成為重組Adeno-HIF1α腺病毒,併進行PCR鑒定及滴度測定. 結果: 經酶切鑒定及基因測序證實重組腺病毒質粒構建成功,包裝後凍融細胞的上清PCR檢測重組腺病毒包裝成功,病毒滴度為2×1012 pfu/L. 結論: 成功構建重組腺病毒Adeno-HIF1α(突變型),為冠心病的突變型HIF1α基因治療研究奠定基礎.
목적: 구건인돌변형저양유도인자1(HIF-1)α선병독표체재체,연구인돌변형HIF-1α기인대관심병적혈관신생작용. 방법: 채용분자극륭기술,유pcDNA3.1(+)-HIF1α(돌변형)질립획득돌변형HIF1α cDNA,극륭도천사질립pShuttle2,이PI-Sce I화I-Ceu I쌍매절중조천사질립,획득함유돌변형HIF1α cDNA적표체합,통과체외련접법여선성화적선병독골가질립Adeno-X Viral DNA련접,중조성pAdeno-HIF1α선병독질립,경매절급측서감정정학후,재HEK293세포중포장성위중조Adeno-HIF1α선병독,병진행PCR감정급적도측정. 결과: 경매절감정급기인측서증실중조선병독질립구건성공,포장후동융세포적상청PCR검측중조선병독포장성공,병독적도위2×1012 pfu/L. 결론: 성공구건중조선병독Adeno-HIF1α(돌변형),위관심병적돌변형HIF1α기인치료연구전정기출.
