CAJ | 학술논문

以本实验室分离的猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型(Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2,APP-2)菌株HB08的基因组为模板,扩增了2871 bp的APP毒素Ⅱ的结构基因apxⅡA,并克隆到pET-28a原核表达载体中构建重组表达质粒pET28aⅡA,转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经SDS-PAGE和Westernblot分析表明,表达的重组蛋白具有良好的反应活性.将表达的蛋白经或不经复性处理,与纯化的天然毒素Ⅱ分别免疫昆明小鼠,同时设PBS空白对照组,每组12只,间隔2周免疫2次,采血检测其抗体效价,二免后2周用致死剂量的APP血清7型(APP-7)菌株(1.08× 108CFU(菌落形成单位,colony form unit)/只)腹腔攻击.结果显示,复性蛋白组的保护率为83.3%,非复性蛋白组的保护率为58.3%,天然毒素蛋白对照组保护率为91.7%,空白对照组小鼠全部死亡,说明复性的重组毒素Ⅱ具有良好的免疫原性.
이본실험실분리적저흉막폐염방선간균혈청2형(Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2,APP-2)균주HB08적기인조위모판,확증료2871 bp적APP독소Ⅱ적결구기인apxⅡA,병극륭도pET-28a원핵표체재체중구건중조표체질립pET28aⅡA,전화도대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3),경SDS-PAGE화Westernblot분석표명,표체적중조단백구유량호적반응활성.장표체적단백경혹불경복성처리,여순화적천연독소Ⅱ분별면역곤명소서,동시설PBS공백대조조,매조12지,간격2주면역2차,채혈검측기항체효개,이면후2주용치사제량적APP혈청7형(APP-7)균주(1.08× 108CFU(균락형성단위,colony form unit)/지)복강공격.결과현시,복성단백조적보호솔위83.3%,비복성단백조적보호솔위58.3%,천연독소단백대조조보호솔위91.7%,공백대조조소서전부사망,설명복성적중조독소Ⅱ구유량호적면역원성.