河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2008年
7期
100-103
,共4页
赵绪永%张改平%朱礼倩%李清州
趙緒永%張改平%硃禮倩%李清州
조서영%장개평%주례천%리청주
鸡胚成纤维细胞(CEF)%T7噬菌体%cDNA表达文库
鷄胚成纖維細胞(CEF)%T7噬菌體%cDNA錶達文庫
계배성섬유세포(CEF)%T7서균체%cDNA표체문고
构建鸡胚成纤维细胞(CEF)T7噬菌体表达型cDNA文库,为筛选和研究CEF上病毒受体分子奠定基础.提取纯化CEF的mRNA,反转录合成双链cDNA,补平末端,连接EcoR Ⅰ/HindⅢ接头,双酶切,凝胶过滤层析除去小于400bp的cDNA片段,合成双链cDNA定向与T7噬菌体左右臂连接,体外包装后建成cDNA表达文库.测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小.结果表明,构建的cDNA文库滴度为2.2×107pfu/mL、扩增后滴度为3.5×1010pfu/mL,重组效率达98%、插入片段多在0.4～3 kb之间,平均插入片段长约1.3 kb.表明所建文库具有很高的质量,从而为筛选目的cDNA克隆奠定了基础.
構建鷄胚成纖維細胞(CEF)T7噬菌體錶達型cDNA文庫,為篩選和研究CEF上病毒受體分子奠定基礎.提取純化CEF的mRNA,反轉錄閤成雙鏈cDNA,補平末耑,連接EcoR Ⅰ/HindⅢ接頭,雙酶切,凝膠過濾層析除去小于400bp的cDNA片段,閤成雙鏈cDNA定嚮與T7噬菌體左右臂連接,體外包裝後建成cDNA錶達文庫.測定文庫大小、重組率,併以PCR鑒定cDNA插入片段的大小.結果錶明,構建的cDNA文庫滴度為2.2×107pfu/mL、擴增後滴度為3.5×1010pfu/mL,重組效率達98%、插入片段多在0.4～3 kb之間,平均插入片段長約1.3 kb.錶明所建文庫具有很高的質量,從而為篩選目的cDNA剋隆奠定瞭基礎.
구건계배성섬유세포(CEF)T7서균체표체형cDNA문고,위사선화연구CEF상병독수체분자전정기출.제취순화CEF적mRNA,반전록합성쌍련cDNA,보평말단,련접EcoR Ⅰ/HindⅢ접두,쌍매절,응효과려층석제거소우400bp적cDNA편단,합성쌍련cDNA정향여T7서균체좌우비련접,체외포장후건성cDNA표체문고.측정문고대소、중조솔,병이PCR감정cDNA삽입편단적대소.결과표명,구건적cDNA문고적도위2.2×107pfu/mL、확증후적도위3.5×1010pfu/mL,중조효솔체98%、삽입편단다재0.4～3 kb지간,평균삽입편단장약1.3 kb.표명소건문고구유흔고적질량,종이위사선목적cDNA극륭전정료기출.
