暨南大学学报(自然科学与医学版)
暨南大學學報(自然科學與醫學版)
기남대학학보(자연과학여의학판)
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2009年
2期
123-127
,共5页
熊亚明%潘善培%陈敬%黄丹%关艺青
熊亞明%潘善培%陳敬%黃丹%關藝青
웅아명%반선배%진경%황단%관예청
卵透明带抗原-3α(pZP3α)%乳酸杆菌%免疫避孕%同源重组%疫苗
卵透明帶抗原-3α(pZP3α)%乳痠桿菌%免疫避孕%同源重組%疫苗
란투명대항원-3α(pZP3α)%유산간균%면역피잉%동원중조%역묘
目的:构建表达猪卵透明带蛋白(pZP3α)的重组乳酸杆菌.方法:用PCR方法扩增得到短小乳酸杆菌染色体中的S-层蛋白的信号肽序列和猪卵透明带的pZP3α基因,并依次克隆到乳酸杆菌整合型表达质粒pllac的lac启动子下游,得到质粒pllac-pZP3α.将质粒pllac-pZP3α电穿孔转化干酪乳酸杆菌(L.casei CECT5276),挑选转化后的耐药菌落,在含5 μg/mL红霉素的MRS培养基中培养,抽提其基因组DNA做模板,PCR鉴定验证pZP3α基因是否整合到乳酸杆菌的基因组中.筛选重组菌在无红霉素选择压力下传代培养直至发生第2次重组使红霉素抗性基因消失.结果:酶切与测序结果表明信号肽和pZP3α基因正确克隆到载体pllac中;PCR鉴定证实pZP3α基因成功重组到乳酸杆菌的基因组中,培养50 d后重组乳酸杆菌抗性消失,用斑点免疫印迹化学发光法检测到经终质量分数为0.75%乳糖诱导后的上清中有pZP3α蛋白分泌.结论:成功构建表达pZP3α的重组乳酸杆菌,pZP3α在乳酸杆菌中得到了稳定的、分泌表达.
目的:構建錶達豬卵透明帶蛋白(pZP3α)的重組乳痠桿菌.方法:用PCR方法擴增得到短小乳痠桿菌染色體中的S-層蛋白的信號肽序列和豬卵透明帶的pZP3α基因,併依次剋隆到乳痠桿菌整閤型錶達質粒pllac的lac啟動子下遊,得到質粒pllac-pZP3α.將質粒pllac-pZP3α電穿孔轉化榦酪乳痠桿菌(L.casei CECT5276),挑選轉化後的耐藥菌落,在含5 μg/mL紅黴素的MRS培養基中培養,抽提其基因組DNA做模闆,PCR鑒定驗證pZP3α基因是否整閤到乳痠桿菌的基因組中.篩選重組菌在無紅黴素選擇壓力下傳代培養直至髮生第2次重組使紅黴素抗性基因消失.結果:酶切與測序結果錶明信號肽和pZP3α基因正確剋隆到載體pllac中;PCR鑒定證實pZP3α基因成功重組到乳痠桿菌的基因組中,培養50 d後重組乳痠桿菌抗性消失,用斑點免疫印跡化學髮光法檢測到經終質量分數為0.75%乳糖誘導後的上清中有pZP3α蛋白分泌.結論:成功構建錶達pZP3α的重組乳痠桿菌,pZP3α在乳痠桿菌中得到瞭穩定的、分泌錶達.
목적:구건표체저란투명대단백(pZP3α)적중조유산간균.방법:용PCR방법확증득도단소유산간균염색체중적S-층단백적신호태서렬화저란투명대적pZP3α기인,병의차극륭도유산간균정합형표체질립pllac적lac계동자하유,득도질립pllac-pZP3α.장질립pllac-pZP3α전천공전화간락유산간균(L.casei CECT5276),도선전화후적내약균락,재함5 μg/mL홍매소적MRS배양기중배양,추제기기인조DNA주모판,PCR감정험증pZP3α기인시부정합도유산간균적기인조중.사선중조균재무홍매소선택압력하전대배양직지발생제2차중조사홍매소항성기인소실.결과:매절여측서결과표명신호태화pZP3α기인정학극륭도재체pllac중;PCR감정증실pZP3α기인성공중조도유산간균적기인조중,배양50 d후중조유산간균항성소실,용반점면역인적화학발광법검측도경종질량분수위0.75%유당유도후적상청중유pZP3α단백분비.결론:성공구건표체pZP3α적중조유산간균,pZP3α재유산간균중득도료은정적、분비표체.
