军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2009年
3期
224-227
,共4页
刘道琴%黄训端%孔小卫%马树梅%刘惠%张部昌
劉道琴%黃訓耑%孔小衛%馬樹梅%劉惠%張部昌
류도금%황훈단%공소위%마수매%류혜%장부창
红色糖多孢菌%酮还原酶%同源重组%3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B
紅色糖多孢菌%酮還原酶%同源重組%3-脫氧-3-羰基-紅黴內酯B
홍색당다포균%동환원매%동원중조%3-탈양-3-탄기-홍매내지B
目的:构建红色糖多孢菌突变菌株,生物合成酮内酯类抗生素.方法:利用反向PCR技术,扩增红色糖多孢菌KR6酮还原酶基因突变DNA片段SP(KR6酶中Gly1141 Ala1142替换成ScrPro),克隆于pWHM3上构建染色体同源重组质粒pWHM3-SP.通过PEG介导原生质体转化,将pWHM3-SP导入红色糖多孢菌中.经染色体二次重组后,筛选出1株红色糖多孢菌KR6酶突变菌株A226-SP.结果:DNA序列分析表明,A226-SP染色体上编码KR6酶中Gly1141Ala1142序列GGTGCG突变成SerPro编码序列AGCCCT.HPLC-HRMS分析证实A226-SP菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B(DOEB),同时检测到其中间产物C18H34O6,但没有发现红霉素产物.结论:Gly1141 Ala1142位于KR6酮还原酶的重要功能位点,红色糖多孢菌A226-SP突变体可以合成酮内酯类化合物.
目的:構建紅色糖多孢菌突變菌株,生物閤成酮內酯類抗生素.方法:利用反嚮PCR技術,擴增紅色糖多孢菌KR6酮還原酶基因突變DNA片段SP(KR6酶中Gly1141 Ala1142替換成ScrPro),剋隆于pWHM3上構建染色體同源重組質粒pWHM3-SP.通過PEG介導原生質體轉化,將pWHM3-SP導入紅色糖多孢菌中.經染色體二次重組後,篩選齣1株紅色糖多孢菌KR6酶突變菌株A226-SP.結果:DNA序列分析錶明,A226-SP染色體上編碼KR6酶中Gly1141Ala1142序列GGTGCG突變成SerPro編碼序列AGCCCT.HPLC-HRMS分析證實A226-SP菌株閤成瞭3-脫氧-3-羰基-紅黴內酯B(DOEB),同時檢測到其中間產物C18H34O6,但沒有髮現紅黴素產物.結論:Gly1141 Ala1142位于KR6酮還原酶的重要功能位點,紅色糖多孢菌A226-SP突變體可以閤成酮內酯類化閤物.
목적:구건홍색당다포균돌변균주,생물합성동내지류항생소.방법:이용반향PCR기술,확증홍색당다포균KR6동환원매기인돌변DNA편단SP(KR6매중Gly1141 Ala1142체환성ScrPro),극륭우pWHM3상구건염색체동원중조질립pWHM3-SP.통과PEG개도원생질체전화,장pWHM3-SP도입홍색당다포균중.경염색체이차중조후,사선출1주홍색당다포균KR6매돌변균주A226-SP.결과:DNA서렬분석표명,A226-SP염색체상편마KR6매중Gly1141Ala1142서렬GGTGCG돌변성SerPro편마서렬AGCCCT.HPLC-HRMS분석증실A226-SP균주합성료3-탈양-3-탄기-홍매내지B(DOEB),동시검측도기중간산물C18H34O6,단몰유발현홍매소산물.결론:Gly1141 Ala1142위우KR6동환원매적중요공능위점,홍색당다포균A226-SP돌변체가이합성동내지류화합물.
