西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2010年
8期
95-100
,共6页
张付云%李妍%李云冰%张瑛%赵小明%杜昱光
張付雲%李妍%李雲冰%張瑛%趙小明%杜昱光
장부운%리연%리운빙%장영%조소명%두욱광
NtSKP1基因%RNA干扰%载体构建%转基因烟草
NtSKP1基因%RNA榦擾%載體構建%轉基因煙草
NtSKP1기인%RNA간우%재체구건%전기인연초
根据枯斑三生烟草SKP1基因(NtSKP1)的序列,设计二对分别含有特定酶切位点的特异引物,以重组质粒pMD18-SKP1为模板,分别扩增目的基因的正反向片段(约473 bp).将反向目的片段插入中间载体pHANNIBAL内含子右侧,正向目的片段插入该载体内含子左侧,再经NotⅠ酶切回收约3 916 bp目的片段,插入到双元载体质粒pART27中,成功构建了含NtSKP1基因片段正反向重复序列的植物表达载体pART27- skp1sa.将pART27- skp1sa 质粒导人根癌农杆菌LBA4404中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得转基因烟草.
根據枯斑三生煙草SKP1基因(NtSKP1)的序列,設計二對分彆含有特定酶切位點的特異引物,以重組質粒pMD18-SKP1為模闆,分彆擴增目的基因的正反嚮片段(約473 bp).將反嚮目的片段插入中間載體pHANNIBAL內含子右側,正嚮目的片段插入該載體內含子左側,再經NotⅠ酶切迴收約3 916 bp目的片段,插入到雙元載體質粒pART27中,成功構建瞭含NtSKP1基因片段正反嚮重複序列的植物錶達載體pART27- skp1sa.將pART27- skp1sa 質粒導人根癌農桿菌LBA4404中併轉化煙草葉片細胞,經選擇分化培養,穫得轉基因煙草.
근거고반삼생연초SKP1기인(NtSKP1)적서렬,설계이대분별함유특정매절위점적특이인물,이중조질립pMD18-SKP1위모판,분별확증목적기인적정반향편단(약473 bp).장반향목적편단삽입중간재체pHANNIBAL내함자우측,정향목적편단삽입해재체내함자좌측,재경NotⅠ매절회수약3 916 bp목적편단,삽입도쌍원재체질립pART27중,성공구건료함NtSKP1기인편단정반향중복서렬적식물표체재체pART27- skp1sa.장pART27- skp1sa 질립도인근암농간균LBA4404중병전화연초협편세포,경선택분화배양,획득전기인연초.
