中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2010年
4期
54-59
,共6页
陈祥%牛中伟%徐正中%孟闯%孙林%黄金林%潘志明%焦新安
陳祥%牛中偉%徐正中%孟闖%孫林%黃金林%潘誌明%焦新安
진상%우중위%서정중%맹틈%손림%황금림%반지명%초신안
牛%γ-干扰素%抗原捕获ELISA%单克隆抗体
牛%γ-榦擾素%抗原捕穫ELISA%單剋隆抗體
우%γ-간우소%항원포획ELISA%단극륭항체
以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸-硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11.将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56U/100μL(30.5pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ.以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%.本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γ ELISA检测试剂盒奠定了基础.
以純化的rHis-BoIFN-γ製備兔多抗血清,辛痠-硫痠銨兩步法對體內誘生的抗rBoIFN-γ單抗腹水進行純化,用美洲商陸素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血產生的分泌性天然BoIFN-γ篩選齣與之反應最佳的單抗5E11.將單抗5E11以40μg/mL濃度包被,與1∶3 000倍稀釋的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配對,以1∶6 000稀釋的商品化酶標羊抗兔IgG為指示抗體,建立瞭BoIFN-γ抗原捕穫ELISA檢測方法,該方法可以檢齣2.56U/100μL(30.5pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ.以商品化試劑盒作為平行對照,將穫得的奶牛臨床檢測血漿樣品使用BoIFN-γ抗原捕穫ELISA法進行檢測,結果顯示兩種方法檢測符閤率達到83.9%.本研究建立的BoIFN-γ抗原捕穫ELISA檢測方法可有效檢測分泌性IFN-γ,為進一步開髮BoIFN-γ ELISA檢測試劑盒奠定瞭基礎.
이순화적rHis-BoIFN-γ제비토다항혈청,신산-류산안량보법대체내유생적항rBoIFN-γ단항복수진행순화,용미주상륙소(Pokeweed mitogen,PWM)자격내우전혈산생적분비성천연BoIFN-γ사선출여지반응최가적단항5E11.장단항5E11이40μg/mL농도포피,여1∶3 000배희석적토항rHis-BoIFN-γ다항혈청(13.8μg/mL)배대,이1∶6 000희석적상품화매표양항토IgG위지시항체,건립료BoIFN-γ항원포획ELISA검측방법,해방법가이검출2.56U/100μL(30.5pg/100μL)적rHis-BoIFN-γ、8U/100μL적rBac-BoIFN-γ화1U/100μL적분비성천연BoIFN-γ.이상품화시제합작위평행대조,장획득적내우림상검측혈장양품사용BoIFN-γ항원포획ELISA법진행검측,결과현시량충방법검측부합솔체도83.9%.본연구건립적BoIFN-γ항원포획ELISA검측방법가유효검측분비성IFN-γ,위진일보개발BoIFN-γ ELISA검측시제합전정료기출.
