农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2004年
3期
278-282
,共5页
曹瑞兵%张素芳%蔡梅红%王艳%陈德胜%陈溥言
曹瑞兵%張素芳%蔡梅紅%王豔%陳德勝%陳溥言
조서병%장소방%채매홍%왕염%진덕성%진부언
猪α-干扰素%基因克隆%大肠杆菌%表达
豬α-榦擾素%基因剋隆%大腸桿菌%錶達
저α-간우소%기인극륭%대장간균%표체
提取经新城疫病毒诱导培养的猪外周血白细胞总RNA,RT-PCR扩增出猪α-干扰素基因并克隆到T载体.测序结果表明,扩增片段含有信号肽的猪α-干扰素完整基因,与GenBank上登录的猪α1-干扰素基因同源性为97.2%.亚克隆猪α-干扰素成熟蛋白编码基因并对其5'段前1个稀有密码子进行大肠杆菌(Escherchia coli)偏嗜性改造.构建了猪α-干扰素原核单纯表达载体pCIFNA,实现了猪α-干扰素在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的15.6%.表达产物以包涵体形式存在,用含6 mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,细胞病变抑制法测定结果表明,重组猪α-干扰素具有较高抗病毒活性,约为1.66x106U/mg.
提取經新城疫病毒誘導培養的豬外週血白細胞總RNA,RT-PCR擴增齣豬α-榦擾素基因併剋隆到T載體.測序結果錶明,擴增片段含有信號肽的豬α-榦擾素完整基因,與GenBank上登錄的豬α1-榦擾素基因同源性為97.2%.亞剋隆豬α-榦擾素成熟蛋白編碼基因併對其5'段前1箇稀有密碼子進行大腸桿菌(Escherchia coli)偏嗜性改造.構建瞭豬α-榦擾素原覈單純錶達載體pCIFNA,實現瞭豬α-榦擾素在大腸桿菌中的錶達,錶達產物約佔菌體總蛋白的15.6%.錶達產物以包涵體形式存在,用含6 mol/L鹽痠胍的變性液溶解及含GSH-GSSG複性液複性處理,複性後的錶達產物經凝膠層析純化後,細胞病變抑製法測定結果錶明,重組豬α-榦擾素具有較高抗病毒活性,約為1.66x106U/mg.
제취경신성역병독유도배양적저외주혈백세포총RNA,RT-PCR확증출저α-간우소기인병극륭도T재체.측서결과표명,확증편단함유신호태적저α-간우소완정기인,여GenBank상등록적저α1-간우소기인동원성위97.2%.아극륭저α-간우소성숙단백편마기인병대기5'단전1개희유밀마자진행대장간균(Escherchia coli)편기성개조.구건료저α-간우소원핵단순표체재체pCIFNA,실현료저α-간우소재대장간균중적표체,표체산물약점균체총단백적15.6%.표체산물이포함체형식존재,용함6 mol/L염산고적변성액용해급함GSH-GSSG복성액복성처리,복성후적표체산물경응효층석순화후,세포병변억제법측정결과표명,중조저α-간우소구유교고항병독활성,약위1.66x106U/mg.
