中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2005年
1期
34-36,40
,共4页
汪学龙%沈继龙%沈际佳%蒋作君
汪學龍%瀋繼龍%瀋際佳%蔣作君
왕학룡%침계룡%침제가%장작군
日本血吸虫%cDNA文库%免疫学筛选%Mago nashi样蛋白%基因克隆
日本血吸蟲%cDNA文庫%免疫學篩選%Mago nashi樣蛋白%基因剋隆
일본혈흡충%cDNA문고%면역학사선%Mago nashi양단백%기인극륭
目的运用免疫学方法筛选日本血吸虫(中国大陆株)童虫cDNA文库,寻找血吸虫新基因,并克隆和鉴定一个日本血吸虫决定性别的Mago nashi样蛋白基因.方法用混合的血吸虫感染者血清免疫学筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,随机挑取阳性重组克隆进行测序,以获得血吸虫基因,并通过BLAST程序进行比较及同源性分析,根据分析结果设计合成引物,用PCR法扩增出日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因(SiM)编码序列,将其克隆入pGEM-T载体和pBK CMV载体,用双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定.结果本研究共挑取7个阳性克隆,通过测序获得了5个有表达序列标签(Expressed Sequence Tag.EST)价值的序列,并进行了同源性分析;用PCR法扩增出大小为441bp SjM开放阅读框,重组质粒pGEM-SjM和pBK CMV-SjM经双酶切均可获得一条为PCR产物一致的DNA片段.结论本实验获得了5个有EST价值的序列,并成功地克隆了其中SjM编码基因.
目的運用免疫學方法篩選日本血吸蟲(中國大陸株)童蟲cDNA文庫,尋找血吸蟲新基因,併剋隆和鑒定一箇日本血吸蟲決定性彆的Mago nashi樣蛋白基因.方法用混閤的血吸蟲感染者血清免疫學篩選日本血吸蟲童蟲cDNA文庫,隨機挑取暘性重組剋隆進行測序,以穫得血吸蟲基因,併通過BLAST程序進行比較及同源性分析,根據分析結果設計閤成引物,用PCR法擴增齣日本血吸蟲Mago nashi樣蛋白基因(SiM)編碼序列,將其剋隆入pGEM-T載體和pBK CMV載體,用雙酶切、以質粒為模闆進行PCR擴增和測序進行鑒定.結果本研究共挑取7箇暘性剋隆,通過測序穫得瞭5箇有錶達序列標籤(Expressed Sequence Tag.EST)價值的序列,併進行瞭同源性分析;用PCR法擴增齣大小為441bp SjM開放閱讀框,重組質粒pGEM-SjM和pBK CMV-SjM經雙酶切均可穫得一條為PCR產物一緻的DNA片段.結論本實驗穫得瞭5箇有EST價值的序列,併成功地剋隆瞭其中SjM編碼基因.
목적운용면역학방법사선일본혈흡충(중국대륙주)동충cDNA문고,심조혈흡충신기인,병극륭화감정일개일본혈흡충결정성별적Mago nashi양단백기인.방법용혼합적혈흡충감염자혈청면역학사선일본혈흡충동충cDNA문고,수궤도취양성중조극륭진행측서,이획득혈흡충기인,병통과BLAST정서진행비교급동원성분석,근거분석결과설계합성인물,용PCR법확증출일본혈흡충Mago nashi양단백기인(SiM)편마서렬,장기극륭입pGEM-T재체화pBK CMV재체,용쌍매절、이질립위모판진행PCR확증화측서진행감정.결과본연구공도취7개양성극륭,통과측서획득료5개유표체서렬표첨(Expressed Sequence Tag.EST)개치적서렬,병진행료동원성분석;용PCR법확증출대소위441bp SjM개방열독광,중조질립pGEM-SjM화pBK CMV-SjM경쌍매절균가획득일조위PCR산물일치적DNA편단.결론본실험획득료5개유EST개치적서렬,병성공지극륭료기중SjM편마기인.
