CAJ | 학술논문

目的从2002年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒, 明确流行株的血清型及基因型,并鉴定该分离株的毒力.方法采集疑似登革热患者血清20份,应用C6/36细胞体外培养的方法进行病毒分离,并合成登革病毒通用引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 后,将PCR扩增产物克隆到T载体进行序列测定和比对.确定血清型后,进一步扩增在病毒进化上有代表意义的病毒血清型特异性E/NS1连接区基因片段,测序后用邻位相连(N-J)法构建登革病毒进化树,分析此次登革病毒流行株的来源.通过乳鼠脑内接种及空斑实验,测定分离株的毒力.结果上述20份血清标本中,5份标本出现明显的细胞病变,主要表现为细胞融合,形成大小不一的空泡和网状结构.RT-PCR扩增、序列测定证实为登革病毒Ⅰ型.E/NS1连接区基因序列片段分析表明,2002年广州分离株(DEN-1/GZ2002)的核苷酸序列与基因型Ⅳ型的DEN-1/T14株(澳大利亚,1981)同源性最高,达98%.N-J法构建进化树显示:11株DEN-1病毒分成3个基因群,分别与Rico-Hesse 1990分型中的Ⅰ, Ⅳ和Ⅴ型以及Ana P. Goncalvez 2002年分型中的亚洲型,南太平洋型和美洲/非洲型相符,本室分离的DEN-1/GZ2002株属于Ⅳ型或者称南太平洋型.DEN-1/GZ2002株脑内接种乳鼠11 d左右导致乳鼠弓背,后肢麻痹、瘫痪,直至死亡.感染Vero细胞8 d后可见小而不透明的空斑,病毒滴度可达106 pfu/ml,TCID50为 4.37 log pfu/0.2 ml.结论 2002年广州登革热流行为登革病毒Ⅰ型感染所致,病毒基因型为Ⅳ型,本实验虽然未明确毒力相关基因,动物实验及细胞感染实验证实该分离株的毒力较弱.
목적종2002년엄주채집적가의등혁병인혈청중분리등혁병독, 명학류행주적혈청형급기인형,병감정해분리주적독력.방법채집의사등혁열환자혈청20빈,응용C6/36세포체외배양적방법진행병독분리,병합성등혁병독통용인물,진행역전록-취합매련반응(RT-PCR) 후,장PCR확증산물극륭도T재체진행서렬측정화비대.학정혈청형후,진일보확증재병독진화상유대표의의적병독혈청형특이성E/NS1련접구기인편단,측서후용린위상련(N-J)법구건등혁병독진화수,분석차차등혁병독류행주적래원.통과유서뇌내접충급공반실험,측정분리주적독력.결과상술20빈혈청표본중,5빈표본출현명현적세포병변,주요표현위세포융합,형성대소불일적공포화망상결구.RT-PCR확증、서렬측정증실위등혁병독Ⅰ형.E/NS1련접구기인서렬편단분석표명,2002년엄주분리주(DEN-1/GZ2002)적핵감산서렬여기인형Ⅳ형적DEN-1/T14주(오대리아,1981)동원성최고,체98%.N-J법구건진화수현시:11주DEN-1병독분성3개기인군,분별여Rico-Hesse 1990분형중적Ⅰ, Ⅳ화Ⅴ형이급Ana P. Goncalvez 2002년분형중적아주형,남태평양형화미주/비주형상부,본실분리적DEN-1/GZ2002주속우Ⅳ형혹자칭남태평양형.DEN-1/GZ2002주뇌내접충유서11 d좌우도치유서궁배,후지마비、탄탄,직지사망.감염Vero세포8 d후가견소이불투명적공반,병독적도가체106 pfu/ml,TCID50위 4.37 log pfu/0.2 ml.결론 2002년엄주등혁열류행위등혁병독Ⅰ형감염소치,병독기인형위Ⅳ형,본실험수연미명학독력상관기인,동물실험급세포감염실험증실해분리주적독력교약.