CAJ | 학술논문

目的:观察增殖和分化两种血管平滑肌细胞表型改变与转化生长因子β/smads信号传递的关系.方法:实验于2003-09/10哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成.取体质量200 g左右的健康雄性SD大鼠,常规胶原酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞.用体积分数为0.2和0.05(去血清培养)胎牛血清和的Dulbecco改良的Eagle培养基,37℃,体积分数0.05 CO2进行培养,2.5 g/L胰酶消化传代.血管平滑肌细胞经锥虫蓝染色,存活细胞数在98%以上.形态学上出现典型的"峰和谷"样生长状态,抗平滑肌特异α-肌动蛋白免疫组织化学染色阳性.取3～8代细胞用于实验.流式细胞分析检测不同表型血管平滑肌细胞增殖能力,蛋白质印迹分析方法检测血管平滑肌细胞分化相关基因平滑肌特异性肌动蛋白表达变化,反转录聚合酶链反应和细胞免疫荧光方法检测转化生长因子βⅠ型受体,smad2,smad3,smad4和smad7的表达变化.结果:①流式细胞分析及蛋白印迹分析方法检测发现,去血清培养后,原代培养大鼠血管平滑肌细胞增殖能力下降;DNA合成前期细胞明显增加[(52.42±2.35)%],细胞分化基因平滑肌特异性α-肌动蛋白明显表达.体积分数为0.2胎牛血清培养后,大鼠血管平滑肌细胞增殖旺盛,DNA合成前期细胞数相对较少[(17.23±1.58)%],细胞分化相关基因平滑肌特异性肌动蛋白表达明显下调.②反转录聚合酶链反应和细胞免疫荧光方法检测发现,去血清培养后的分化表型平滑肌细胞中,转化生长因子βⅠ型受体表达增加,smad2和smad3表达无明显变化,smad4表达增加,smad7表达下降.而高血清培养诱导平滑肌细胞转化为增殖表型后,转化生长因子βⅠ型受体表达下降,smad4表达下降,抑制型smad7表达增加,smad2和smad3表达无明显变化.结论:转化生长因子β/smads表达与血管平滑肌细胞表型状态密切相关.血管平滑肌细胞分化时,可能通过转化生长因子βⅠ型受体/smad4调控细胞分化功能;而血管平滑肌细胞增殖时,细胞则可能通过smad7信号传导通路发挥作用.提示转化生长因子β/smads在血管平滑肌细胞由合成表型逆转为分化表型的分子调控中发挥作用. 目的:觀察增殖和分化兩種血管平滑肌細胞錶型改變與轉化生長因子β/smads信號傳遞的關繫.方法:實驗于2003-09/10哈爾濱醫科大學醫學遺傳學研究室完成.取體質量200 g左右的健康雄性SD大鼠,常規膠原酶消化法原代培養大鼠血管平滑肌細胞.用體積分數為0.2和0.05(去血清培養)胎牛血清和的Dulbecco改良的Eagle培養基,37℃,體積分數0.05 CO2進行培養,2.5 g/L胰酶消化傳代.血管平滑肌細胞經錐蟲藍染色,存活細胞數在98%以上.形態學上齣現典型的"峰和穀"樣生長狀態,抗平滑肌特異α-肌動蛋白免疫組織化學染色暘性.取3～8代細胞用于實驗.流式細胞分析檢測不同錶型血管平滑肌細胞增殖能力,蛋白質印跡分析方法檢測血管平滑肌細胞分化相關基因平滑肌特異性肌動蛋白錶達變化,反轉錄聚閤酶鏈反應和細胞免疫熒光方法檢測轉化生長因子βⅠ型受體,smad2,smad3,smad4和smad7的錶達變化.結果:①流式細胞分析及蛋白印跡分析方法檢測髮現,去血清培養後,原代培養大鼠血管平滑肌細胞增殖能力下降;DNA閤成前期細胞明顯增加[(52.42±2.35)%],細胞分化基因平滑肌特異性α-肌動蛋白明顯錶達.體積分數為0.2胎牛血清培養後,大鼠血管平滑肌細胞增殖旺盛,DNA閤成前期細胞數相對較少[(17.23±1.58)%],細胞分化相關基因平滑肌特異性肌動蛋白錶達明顯下調.②反轉錄聚閤酶鏈反應和細胞免疫熒光方法檢測髮現,去血清培養後的分化錶型平滑肌細胞中,轉化生長因子βⅠ型受體錶達增加,smad2和smad3錶達無明顯變化,smad4錶達增加,smad7錶達下降.而高血清培養誘導平滑肌細胞轉化為增殖錶型後,轉化生長因子βⅠ型受體錶達下降,smad4錶達下降,抑製型smad7錶達增加,smad2和smad3錶達無明顯變化.結論:轉化生長因子β/smads錶達與血管平滑肌細胞錶型狀態密切相關.血管平滑肌細胞分化時,可能通過轉化生長因子βⅠ型受體/smad4調控細胞分化功能;而血管平滑肌細胞增殖時,細胞則可能通過smad7信號傳導通路髮揮作用.提示轉化生長因子β/smads在血管平滑肌細胞由閤成錶型逆轉為分化錶型的分子調控中髮揮作用.
목적:관찰증식화분화량충혈관평활기세포표형개변여전화생장인자β/smads신호전체적관계.방법:실험우2003-09/10합이빈의과대학의학유전학연구실완성.취체질량200 g좌우적건강웅성SD대서,상규효원매소화법원대배양대서혈관평활기세포.용체적분수위0.2화0.05(거혈청배양)태우혈청화적Dulbecco개량적Eagle배양기,37℃,체적분수0.05 CO2진행배양,2.5 g/L이매소화전대.혈관평활기세포경추충람염색,존활세포수재98%이상.형태학상출현전형적"봉화곡"양생장상태,항평활기특이α-기동단백면역조직화학염색양성.취3～8대세포용우실험.류식세포분석검측불동표형혈관평활기세포증식능력,단백질인적분석방법검측혈관평활기세포분화상관기인평활기특이성기동단백표체변화,반전록취합매련반응화세포면역형광방법검측전화생장인자βⅠ형수체,smad2,smad3,smad4화smad7적표체변화.결과:①류식세포분석급단백인적분석방법검측발현,거혈청배양후,원대배양대서혈관평활기세포증식능력하강;DNA합성전기세포명현증가[(52.42±2.35)%],세포분화기인평활기특이성α-기동단백명현표체.체적분수위0.2태우혈청배양후,대서혈관평활기세포증식왕성,DNA합성전기세포수상대교소[(17.23±1.58)%],세포분화상관기인평활기특이성기동단백표체명현하조.②반전록취합매련반응화세포면역형광방법검측발현,거혈청배양후적분화표형평활기세포중,전화생장인자βⅠ형수체표체증가,smad2화smad3표체무명현변화,smad4표체증가,smad7표체하강.이고혈청배양유도평활기세포전화위증식표형후,전화생장인자βⅠ형수체표체하강,smad4표체하강,억제형smad7표체증가,smad2화smad3표체무명현변화.결론:전화생장인자β/smads표체여혈관평활기세포표형상태밀절상관.혈관평활기세포분화시,가능통과전화생장인자βⅠ형수체/smad4조공세포분화공능;이혈관평활기세포증식시,세포칙가능통과smad7신호전도통로발휘작용.제시전화생장인자β/smads재혈관평활기세포유합성표형역전위분화표형적분자조공중발휘작용.