CAJ | 학술논문

目的:制备可特异识别人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)膜抗原的单克隆抗体,筛选出亲和力较高并对胃癌细胞有明显抑制作用的克隆.方法:以高表达HER2膜抗原的人胃癌细胞系NCI-N87免疫BABL/C小鼠,免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O融合,ELISA法筛选出HER2反应阳性克隆株,活细胞免疫荧光法检测获得膜阳性克隆株,使用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,MTT法检测抗体对NCI-N87细胞增殖的抑制,采用与群司珠单抗的夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定单抗结合HER2抗原的表位,免疫组化、Western blotting进一步检测抗HER2抗体在不同条件下与HER2抗原反应情况.结果:细胞融合产生1 442个单个集落的杂交瘤,重组HER2抗原ELISA筛选出HER2反应阳性克隆79株,活细胞免疫荧光检测获得较强膜阳性克隆7株,并测定其亚型,其中命名为15C15的1株属IgG1K类单抗,免疫竞争及结合实验显示15C15与群司珠人源化抗体识别不同的表位.细胞增殖筛选显示15C15能显著抑制人胃癌NCI-N87细胞的增殖,在80 μg/ml时抑制率可达34.8%.免疫组化显示15C15能识别部分石蜡包埋的HER2抗原,Western blotting显示15C15不能结合电泳条件下变性为线形结构的HER2抗原.结论:建立了高通量制备、筛选和鉴定靶向HER2抑制胃癌细胞生长的功能性单抗技术,获得1株可特异识别HER2抗原的明显抑制胃癌细胞增殖的IgG1类单抗15C15,具有人源化改造后用于治疗的应用潜力.
목적:제비가특이식별인표피생장인자수체-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)막항원적단극륭항체,사선출친화력교고병대위암세포유명현억제작용적극륭.방법:이고표체HER2막항원적인위암세포계NCI-N87면역BABL/C소서,면역소서비세포여소서골수류세포SP2/O융합,ELISA법사선출HER2반응양성극륭주,활세포면역형광법검측획득막양성극륭주,사용항체아형감정시제합감정항체아형,MTT법검측항체대NCI-N87세포증식적억제,채용여군사주단항적협심ELISA화경쟁억제ELISA감정단항결합HER2항원적표위,면역조화、Western blotting진일보검측항HER2항체재불동조건하여HER2항원반응정황.결과:세포융합산생1 442개단개집락적잡교류,중조HER2항원ELISA사선출HER2반응양성극륭79주,활세포면역형광검측획득교강막양성극륭7주,병측정기아형,기중명명위15C15적1주속IgG1K류단항,면역경쟁급결합실험현시15C15여군사주인원화항체식별불동적표위.세포증식사선현시15C15능현저억제인위암NCI-N87세포적증식,재80 μg/ml시억제솔가체34.8%.면역조화현시15C15능식별부분석사포매적HER2항원,Western blotting현시15C15불능결합전영조건하변성위선형결구적HER2항원.결론:건립료고통량제비、사선화감정파향HER2억제위암세포생장적공능성단항기술,획득1주가특이식별HER2항원적명현억제위암세포증식적IgG1류단항15C15,구유인원화개조후용우치료적응용잠력.