CAJ | 학술논문

目的:对鼠白细胞介素15受体α亚单位(IL-15Rα)的胞外区段,即可溶性IL-15Rα(sIL-15Rα)进行原核表达及纯化,并测定其配体结合能力及相应生物学功能.方法:采用RT-PCR方法,以鼠脾脏细胞总RNA为模板扩增编码sIL-15Rα的基因片段,经测序确证后与原核表达载体pQE-30连接,所得重组表达质粒pQE-30 /sIL-15Rα转化E.coli M15构建表达重组子.通过降低诱导温度和IPTG浓度的方式实现重组蛋白的可溶性表达,金属镍螯合的Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,并经SDS-PAGE和Western blot验证.采用固相受体结合分析法测定重组蛋白与IL-15间的亲和力,并以CTLL-2细胞为靶细胞测定重组蛋白的生物学活性.结果:成功构建了重组表达质粒pQE-30 /sIL-15Rα,并在25℃、0.5 mmol/L IPTG条件下实现了重组蛋白的可溶性表达.所得重组蛋白的相对分子量约为29 kD,纯度大于95%,与IL-15之间的亲和力为4.9×10-11 mol/L,具有显著的协同IL-15促CTLL-2细胞增殖效应.结论:获得了功能性的重组蛋白sIL-15Rα,为深入系统地研究IL-15Rα的独特生物学性状,以及开展IL-15靶向性的研究工作奠定了基础.
목적:대서백세포개소15수체α아단위(IL-15Rα)적포외구단,즉가용성IL-15Rα(sIL-15Rα)진행원핵표체급순화,병측정기배체결합능력급상응생물학공능.방법:채용RT-PCR방법,이서비장세포총RNA위모판확증편마sIL-15Rα적기인편단,경측서학증후여원핵표체재체pQE-30련접,소득중조표체질립pQE-30 /sIL-15Rα전화E.coli M15구건표체중조자.통과강저유도온도화IPTG농도적방식실현중조단백적가용성표체,금속얼오합적Ni-NTA친화층석주순화목적단백,병경SDS-PAGE화Western blot험증.채용고상수체결합분석법측정중조단백여IL-15간적친화력,병이CTLL-2세포위파세포측정중조단백적생물학활성.결과:성공구건료중조표체질립pQE-30 /sIL-15Rα,병재25℃、0.5 mmol/L IPTG조건하실현료중조단백적가용성표체.소득중조단백적상대분자량약위29 kD,순도대우95%,여IL-15지간적친화력위4.9×10-11 mol/L,구유현저적협동IL-15촉CTLL-2세포증식효응.결론:획득료공능성적중조단백sIL-15Rα,위심입계통지연구IL-15Rα적독특생물학성상,이급개전IL-15파향성적연구공작전정료기출.