海南医学院学报
海南醫學院學報
해남의학원학보
2009年
8期
834-837,840
,共5页
卵泡刺激素受体%原核%表达%生物信息学分析
卵泡刺激素受體%原覈%錶達%生物信息學分析
란포자격소수체%원핵%표체%생물신식학분석
目的:克隆小鼠卵泡刺激素受体(FSHR)基因N-端部分片段(28-90aa)(mFSHRn);预测其编码蛋白作为候选避孕疫苗的可行性;构建原核表达重组质粒,并在大肠杆菌中表达.方法:提取小鼠睾丸组织总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术反转录成cDNA,按照GeneBank中小鼠FSHRN-端序列设计引物,扩增基因片段并插入pET32a栽体,测序鉴定后做生物信息学分析;质粒转化E.co-li BL21(DE3)感受态菌株诱导表达蛋白.结果:扩增片段长度为186 bp,测序结果与预期结果完全一致,生物信息学分析其编码蛋白具有良好的抗原性;重组原核表达质粒经鉴定获得正确重组子并诱导表达.结论:mFSHRn蛋白可作为良好的候选避孕疫苗,成功构建了pET32a-mFHSRn原核表达重组质粒,获得可表达mFHSRn的大肠杆菌菌株,为后续的相关研究奠定了基础.
目的:剋隆小鼠卵泡刺激素受體(FSHR)基因N-耑部分片段(28-90aa)(mFSHRn);預測其編碼蛋白作為候選避孕疫苗的可行性;構建原覈錶達重組質粒,併在大腸桿菌中錶達.方法:提取小鼠睪汍組織總RNA,利用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)技術反轉錄成cDNA,按照GeneBank中小鼠FSHRN-耑序列設計引物,擴增基因片段併插入pET32a栽體,測序鑒定後做生物信息學分析;質粒轉化E.co-li BL21(DE3)感受態菌株誘導錶達蛋白.結果:擴增片段長度為186 bp,測序結果與預期結果完全一緻,生物信息學分析其編碼蛋白具有良好的抗原性;重組原覈錶達質粒經鑒定穫得正確重組子併誘導錶達.結論:mFSHRn蛋白可作為良好的候選避孕疫苗,成功構建瞭pET32a-mFHSRn原覈錶達重組質粒,穫得可錶達mFHSRn的大腸桿菌菌株,為後續的相關研究奠定瞭基礎.
목적:극륭소서란포자격소수체(FSHR)기인N-단부분편단(28-90aa)(mFSHRn);예측기편마단백작위후선피잉역묘적가행성;구건원핵표체중조질립,병재대장간균중표체.방법:제취소서고환조직총RNA,이용역전록-취합매련반응(RT-PCR)기술반전록성cDNA,안조GeneBank중소서FSHRN-단서렬설계인물,확증기인편단병삽입pET32a재체,측서감정후주생물신식학분석;질립전화E.co-li BL21(DE3)감수태균주유도표체단백.결과:확증편단장도위186 bp,측서결과여예기결과완전일치,생물신식학분석기편마단백구유량호적항원성;중조원핵표체질립경감정획득정학중조자병유도표체.결론:mFSHRn단백가작위량호적후선피잉역묘,성공구건료pET32a-mFHSRn원핵표체중조질립,획득가표체mFHSRn적대장간균균주,위후속적상관연구전정료기출.
