生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2005年
2期
117-120
,共4页
赵庆国%周煜%张进%朱恒奇%曹志国%卢柏松%黄培堂
趙慶國%週煜%張進%硃恆奇%曹誌國%盧柏鬆%黃培堂
조경국%주욱%장진%주항기%조지국%로백송%황배당
配子生成素结合蛋白%多克隆抗体%表达谱
配子生成素結閤蛋白%多剋隆抗體%錶達譜
배자생성소결합단백%다극륭항체%표체보
体外实验研究表明配子生成素结合蛋白1(GGNBP1)可能与GGN1相互作用形成睾丸特异性复合物,在精子生成过程中发挥作用.从小鼠睾丸总RNA中反转录扩增Ggnbpl全长cDNA,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达GGNBP1,经聚丙烯酰胺凝胶纯化后免疫新西兰白兔,制备兔多抗血清.镍离子金属螯合柱纯化表达的GGNBP1蛋白,与NHS活化基团交联,制备GGNBP1抗体亲和层析柱,纯化GGNBP1多抗.在293FT细胞中瞬时表达Myc-GGNBP1融合蛋白,用于Mvc单抗验证GGNBP1抗体特异性,结果证明获得了特异性的GGNBP1抗体.分别制备小鼠脑、心、肺、肝、脾、肾、肌肉、卵巢、睾丸和子宫组织匀浆,用GGNBP1抗体进行Western印迹分析,结果仅在睾丸组织匀浆中检测到GGNBP1特异性条带,证明GGNBP1是睾丸特异性表达蛋白.
體外實驗研究錶明配子生成素結閤蛋白1(GGNBP1)可能與GGN1相互作用形成睪汍特異性複閤物,在精子生成過程中髮揮作用.從小鼠睪汍總RNA中反轉錄擴增Ggnbpl全長cDNA,構建錶達質粒,在大腸桿菌中錶達GGNBP1,經聚丙烯酰胺凝膠純化後免疫新西蘭白兔,製備兔多抗血清.鎳離子金屬螯閤柱純化錶達的GGNBP1蛋白,與NHS活化基糰交聯,製備GGNBP1抗體親和層析柱,純化GGNBP1多抗.在293FT細胞中瞬時錶達Myc-GGNBP1融閤蛋白,用于Mvc單抗驗證GGNBP1抗體特異性,結果證明穫得瞭特異性的GGNBP1抗體.分彆製備小鼠腦、心、肺、肝、脾、腎、肌肉、卵巢、睪汍和子宮組織勻漿,用GGNBP1抗體進行Western印跡分析,結果僅在睪汍組織勻漿中檢測到GGNBP1特異性條帶,證明GGNBP1是睪汍特異性錶達蛋白.
체외실험연구표명배자생성소결합단백1(GGNBP1)가능여GGN1상호작용형성고환특이성복합물,재정자생성과정중발휘작용.종소서고환총RNA중반전록확증Ggnbpl전장cDNA,구건표체질립,재대장간균중표체GGNBP1,경취병희선알응효순화후면역신서란백토,제비토다항혈청.얼리자금속오합주순화표체적GGNBP1단백,여NHS활화기단교련,제비GGNBP1항체친화층석주,순화GGNBP1다항.재293FT세포중순시표체Myc-GGNBP1융합단백,용우Mvc단항험증GGNBP1항체특이성,결과증명획득료특이성적GGNBP1항체.분별제비소서뇌、심、폐、간、비、신、기육、란소、고환화자궁조직균장,용GGNBP1항체진행Western인적분석,결과부재고환조직균장중검측도GGNBP1특이성조대,증명GGNBP1시고환특이성표체단백.
