中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
11期
77-81
,共5页
韩凌霞%李亚明%尹岚岚%司昌德%于海波%曲连东
韓凌霞%李亞明%尹嵐嵐%司昌德%于海波%麯連東
한릉하%리아명%윤람람%사창덕%우해파%곡련동
马传染性贫血病毒%基因转移载体%鸡β-肌动蛋白第一内含子%增强绿色荧光蛋白
馬傳染性貧血病毒%基因轉移載體%鷄β-肌動蛋白第一內含子%增彊綠色熒光蛋白
마전염성빈혈병독%기인전이재체%계β-기동단백제일내함자%증강록색형광단백
以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)基因转移载体pcPPTWPRE为基础,用含不同长度片段的鸡β-肌动蛋白启动子替换原有的人巨细胞病毒立即早期启动子(CMVIEp)启动外源基因的表达,分别构建了2个基因转移载体,含部分第一内含子的pWCAGP0.8和含全长内含子的pWCAGP1.6.连同已构建的不含内含子的质粒pcPPTWCAG,采用磷酸钙法分别转染HEK293细胞和DF-1细胞,利用荧光显微镜观察报告基因eGFP蛋白的表达.并利用流式细胞仪定量.统计学分析结果表明,在HEK293细胞中,pcPPTWCAG、pWCAGP0.8和pWCAGP1.6表达阳性率分别为47.9%、46.1%和23.8%,转染后48h,收获细胞,利用流式细胞仪比较转染细胞中EGFP表达阳性细胞的百分率.结果表明,在HEK293细胞中,pcpPTWCAG、pWCAGP0.8和pWCAGP1.6的阳性细胞分别占计数细胞的47.9%、46.1%和23.8%;在DF-1细胞中,依次分别为12.4%、9.5%和4.2%,pcPPTWCAG与pWCAGP1.6差异显著.表明不含内含子的EIAV载体质粒表达EGFP的能力高于含部分和全长内含子的载体.
以馬傳染性貧血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)基因轉移載體pcPPTWPRE為基礎,用含不同長度片段的鷄β-肌動蛋白啟動子替換原有的人巨細胞病毒立即早期啟動子(CMVIEp)啟動外源基因的錶達,分彆構建瞭2箇基因轉移載體,含部分第一內含子的pWCAGP0.8和含全長內含子的pWCAGP1.6.連同已構建的不含內含子的質粒pcPPTWCAG,採用燐痠鈣法分彆轉染HEK293細胞和DF-1細胞,利用熒光顯微鏡觀察報告基因eGFP蛋白的錶達.併利用流式細胞儀定量.統計學分析結果錶明,在HEK293細胞中,pcPPTWCAG、pWCAGP0.8和pWCAGP1.6錶達暘性率分彆為47.9%、46.1%和23.8%,轉染後48h,收穫細胞,利用流式細胞儀比較轉染細胞中EGFP錶達暘性細胞的百分率.結果錶明,在HEK293細胞中,pcpPTWCAG、pWCAGP0.8和pWCAGP1.6的暘性細胞分彆佔計數細胞的47.9%、46.1%和23.8%;在DF-1細胞中,依次分彆為12.4%、9.5%和4.2%,pcPPTWCAG與pWCAGP1.6差異顯著.錶明不含內含子的EIAV載體質粒錶達EGFP的能力高于含部分和全長內含子的載體.
이마전염성빈혈병독(equine infectious anemia virus,EIAV)기인전이재체pcPPTWPRE위기출,용함불동장도편단적계β-기동단백계동자체환원유적인거세포병독립즉조기계동자(CMVIEp)계동외원기인적표체,분별구건료2개기인전이재체,함부분제일내함자적pWCAGP0.8화함전장내함자적pWCAGP1.6.련동이구건적불함내함자적질립pcPPTWCAG,채용린산개법분별전염HEK293세포화DF-1세포,이용형광현미경관찰보고기인eGFP단백적표체.병이용류식세포의정량.통계학분석결과표명,재HEK293세포중,pcPPTWCAG、pWCAGP0.8화pWCAGP1.6표체양성솔분별위47.9%、46.1%화23.8%,전염후48h,수획세포,이용류식세포의비교전염세포중EGFP표체양성세포적백분솔.결과표명,재HEK293세포중,pcpPTWCAG、pWCAGP0.8화pWCAGP1.6적양성세포분별점계수세포적47.9%、46.1%화23.8%;재DF-1세포중,의차분별위12.4%、9.5%화4.2%,pcPPTWCAG여pWCAGP1.6차이현저.표명불함내함자적EIAV재체질립표체EGFP적능력고우함부분화전장내함자적재체.
