贵阳医学院学报
貴暘醫學院學報
귀양의학원학보
JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE
2010年
1期
13-16
,共4页
田丹%孙永萍%汤贤英%马锐%姚新生
田丹%孫永萍%湯賢英%馬銳%姚新生
전단%손영평%탕현영%마예%요신생
多系统萎缩%互补决定区%荧光定量PCR%溶解曲线
多繫統萎縮%互補決定區%熒光定量PCR%溶解麯線
다계통위축%호보결정구%형광정량PCR%용해곡선
目的:利用荧光定量PCR溶解曲线分析技术检测1例多系统萎缩患者TCR α链CDR3谱系.方法:提取1例多系统萎缩患者和1例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCR α链胚系可变区基因家族 (TRAV)设计上游引物,共同的TCR α链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单、寡、多克隆增生,挑选单克隆进行PCR扩增,扩增产物行普通琼脂糖凝胶回收后测序分析.结果:多系统萎缩患者和正常人PBMC的32个TCR α链TRAV家族CDR3谱型的FQ-PCR产物的各家族相对定量表达不一;正常人的32个TCR α链TRAV家族CDR3谱型的溶解曲线图表现为多个峰型的高斯分布,多系统萎缩患者的TRAV10、TRAV15、TRAV29家族CDR3谱型的溶解曲线表现为单峰的克隆性增生,其他家族为多峰、寡峰的多克隆及寡克隆增生,未出现缺失的家族,对单峰的TRAV15家族的测序得到的CDR3区的氨基酸组成为:SAIYFCAEDRDSTLTFG.结论:该多系统萎缩患者的PMBC中,存在TCR α链CDR3谱系漂移.
目的:利用熒光定量PCR溶解麯線分析技術檢測1例多繫統萎縮患者TCR α鏈CDR3譜繫.方法:提取1例多繫統萎縮患者和1例正常人外週血單箇覈細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的總RNA,逆轉錄成cDNA,以32箇人TCR α鏈胚繫可變區基因傢族 (TRAV)設計上遊引物,共同的TCR α鏈恆定區基因傢族(TRAC)設計下遊引物,熒光定量PCR(FQ-PCR)擴增32箇TRAV基因各傢族CDR3譜繫,溶解麯線法分析各傢族CDR3譜繫的單、寡、多剋隆增生,挑選單剋隆進行PCR擴增,擴增產物行普通瓊脂糖凝膠迴收後測序分析.結果:多繫統萎縮患者和正常人PBMC的32箇TCR α鏈TRAV傢族CDR3譜型的FQ-PCR產物的各傢族相對定量錶達不一;正常人的32箇TCR α鏈TRAV傢族CDR3譜型的溶解麯線圖錶現為多箇峰型的高斯分佈,多繫統萎縮患者的TRAV10、TRAV15、TRAV29傢族CDR3譜型的溶解麯線錶現為單峰的剋隆性增生,其他傢族為多峰、寡峰的多剋隆及寡剋隆增生,未齣現缺失的傢族,對單峰的TRAV15傢族的測序得到的CDR3區的氨基痠組成為:SAIYFCAEDRDSTLTFG.結論:該多繫統萎縮患者的PMBC中,存在TCR α鏈CDR3譜繫漂移.
목적:이용형광정량PCR용해곡선분석기술검측1례다계통위축환자TCR α련CDR3보계.방법:제취1례다계통위축환자화1례정상인외주혈단개핵세포(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)중적총RNA,역전록성cDNA,이32개인TCR α련배계가변구기인가족 (TRAV)설계상유인물,공동적TCR α련항정구기인가족(TRAC)설계하유인물,형광정량PCR(FQ-PCR)확증32개TRAV기인각가족CDR3보계,용해곡선법분석각가족CDR3보계적단、과、다극륭증생,도선단극륭진행PCR확증,확증산물행보통경지당응효회수후측서분석.결과:다계통위축환자화정상인PBMC적32개TCR α련TRAV가족CDR3보형적FQ-PCR산물적각가족상대정량표체불일;정상인적32개TCR α련TRAV가족CDR3보형적용해곡선도표현위다개봉형적고사분포,다계통위축환자적TRAV10、TRAV15、TRAV29가족CDR3보형적용해곡선표현위단봉적극륭성증생,기타가족위다봉、과봉적다극륭급과극륭증생,미출현결실적가족,대단봉적TRAV15가족적측서득도적CDR3구적안기산조성위:SAIYFCAEDRDSTLTFG.결론:해다계통위축환자적PMBC중,존재TCR α련CDR3보계표이.
