中国医疗前沿
中國醫療前沿
중국의료전연
CHINA HEALTHCARE INNOVATION
2012年
9期
9-11,2
,共4页
骨髓间充质干细胞%SOX9%慢病毒%软骨分化
骨髓間充質榦細胞%SOX9%慢病毒%軟骨分化
골수간충질간세포%SOX9%만병독%연골분화
目的 构建慢病毒-SOX9 基因载体并转染小鼠骨髓间充质干细胞以得到用于基因治疗软骨损伤的种子细胞.方法 自Gene bank中获得小鼠SOX9 的cDNA序列(NM_011448.4),设计两端引物,并在其两端分别引入Xhol和BamHI 酶切位点序列,用RT-PCR法扩增出SOX9cDNA,连入慢病毒表达载体,构建慢病毒-SOX9-EGFP(Lenti-SOX9-EGFP) 重组体.通过Real time 定量PCR法测定滴度后使用Lenti-SOX9-EGFP转染小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs).采用免疫荧光和Westernblotting鉴定SOX9 在mBMSCs中的表达.结果 PCR(445bp)、DNA测序、Western blotting(83KDr)检测证明Lenti-SOX9-EGFP载体构建成功.经Real time定量PCR法测定的病毒滴度为2×108TU/ml.Lenti-SOX9-EGFP 转染mBMSCs 72h后经免疫荧光检测约80% 的mBMSCs可表达SOX9.Western blotting也证明了SOX9 在经SOX9 基因转染的mBMSCs内稳定表达.结论 获得了稳定表达SOX9 的mBMSCs,为基因治疗关节软骨损伤奠定了基础.
目的 構建慢病毒-SOX9 基因載體併轉染小鼠骨髓間充質榦細胞以得到用于基因治療軟骨損傷的種子細胞.方法 自Gene bank中穫得小鼠SOX9 的cDNA序列(NM_011448.4),設計兩耑引物,併在其兩耑分彆引入Xhol和BamHI 酶切位點序列,用RT-PCR法擴增齣SOX9cDNA,連入慢病毒錶達載體,構建慢病毒-SOX9-EGFP(Lenti-SOX9-EGFP) 重組體.通過Real time 定量PCR法測定滴度後使用Lenti-SOX9-EGFP轉染小鼠骨髓間充質榦細胞(mBMSCs).採用免疫熒光和Westernblotting鑒定SOX9 在mBMSCs中的錶達.結果 PCR(445bp)、DNA測序、Western blotting(83KDr)檢測證明Lenti-SOX9-EGFP載體構建成功.經Real time定量PCR法測定的病毒滴度為2×108TU/ml.Lenti-SOX9-EGFP 轉染mBMSCs 72h後經免疫熒光檢測約80% 的mBMSCs可錶達SOX9.Western blotting也證明瞭SOX9 在經SOX9 基因轉染的mBMSCs內穩定錶達.結論 穫得瞭穩定錶達SOX9 的mBMSCs,為基因治療關節軟骨損傷奠定瞭基礎.
목적 구건만병독-SOX9 기인재체병전염소서골수간충질간세포이득도용우기인치료연골손상적충자세포.방법 자Gene bank중획득소서SOX9 적cDNA서렬(NM_011448.4),설계량단인물,병재기량단분별인입Xhol화BamHI 매절위점서렬,용RT-PCR법확증출SOX9cDNA,련입만병독표체재체,구건만병독-SOX9-EGFP(Lenti-SOX9-EGFP) 중조체.통과Real time 정량PCR법측정적도후사용Lenti-SOX9-EGFP전염소서골수간충질간세포(mBMSCs).채용면역형광화Westernblotting감정SOX9 재mBMSCs중적표체.결과 PCR(445bp)、DNA측서、Western blotting(83KDr)검측증명Lenti-SOX9-EGFP재체구건성공.경Real time정량PCR법측정적병독적도위2×108TU/ml.Lenti-SOX9-EGFP 전염mBMSCs 72h후경면역형광검측약80% 적mBMSCs가표체SOX9.Western blotting야증명료SOX9 재경SOX9 기인전염적mBMSCs내은정표체.결론 획득료은정표체SOX9 적mBMSCs,위기인치료관절연골손상전정료기출.
