细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2002年
4期
383-386
,共4页
王宏坤%朱平%王彦宏%赵旭东%陈常庆
王宏坤%硃平%王彥宏%趙旭東%陳常慶
왕굉곤%주평%왕언굉%조욱동%진상경
Ⅱ型胶原蛋白%表达%类风湿性关节炎%多肽
Ⅱ型膠原蛋白%錶達%類風濕性關節炎%多肽
Ⅱ형효원단백%표체%류풍습성관절염%다태
目的构建编码人Ⅱ型胶原蛋白250～270多肽片段(HuC Ⅱ 250～270)的多聚基因,以获得高效表达、高度可溶和便于纯化的重组多肽基因.方法选用大肠杆菌(E.coli)偏爱密码子优化HuC Ⅱ 250～270的基因组成.通过化学合成和PCR法,获得HuC Ⅱ 250～270的基因,并利用Bam HI和BglⅡ同裂酶进行酶切位点串联获得6聚体.对影响重组HuC Ⅱ 250～270表达的各种因素进行系统研究,以获得优化表达的条件.对表达产物进行分离纯化.结果酶切分析和DNA测序证实,6聚目的基因的构建正确.融合表达的量明显高于非融合表达,在优化条件下,可达30%.表达产物的可溶性明显提高(在90%以上),其相对分子质量(Mr)与预期的相符,纯化后的纯度达90%以上.结论实现了HuC Ⅱ 250～270的高效表达,为研究类风湿性关节炎的发病机制和治疗提供了实验依据.为在原核细胞中高效表达的胶原蛋白的功能性小片段,提供了可供参考的借鉴.
目的構建編碼人Ⅱ型膠原蛋白250～270多肽片段(HuC Ⅱ 250～270)的多聚基因,以穫得高效錶達、高度可溶和便于純化的重組多肽基因.方法選用大腸桿菌(E.coli)偏愛密碼子優化HuC Ⅱ 250～270的基因組成.通過化學閤成和PCR法,穫得HuC Ⅱ 250～270的基因,併利用Bam HI和BglⅡ同裂酶進行酶切位點串聯穫得6聚體.對影響重組HuC Ⅱ 250～270錶達的各種因素進行繫統研究,以穫得優化錶達的條件.對錶達產物進行分離純化.結果酶切分析和DNA測序證實,6聚目的基因的構建正確.融閤錶達的量明顯高于非融閤錶達,在優化條件下,可達30%.錶達產物的可溶性明顯提高(在90%以上),其相對分子質量(Mr)與預期的相符,純化後的純度達90%以上.結論實現瞭HuC Ⅱ 250～270的高效錶達,為研究類風濕性關節炎的髮病機製和治療提供瞭實驗依據.為在原覈細胞中高效錶達的膠原蛋白的功能性小片段,提供瞭可供參攷的藉鑒.
목적구건편마인Ⅱ형효원단백250～270다태편단(HuC Ⅱ 250～270)적다취기인,이획득고효표체、고도가용화편우순화적중조다태기인.방법선용대장간균(E.coli)편애밀마자우화HuC Ⅱ 250～270적기인조성.통과화학합성화PCR법,획득HuC Ⅱ 250～270적기인,병이용Bam HI화BglⅡ동렬매진행매절위점천련획득6취체.대영향중조HuC Ⅱ 250～270표체적각충인소진행계통연구,이획득우화표체적조건.대표체산물진행분리순화.결과매절분석화DNA측서증실,6취목적기인적구건정학.융합표체적량명현고우비융합표체,재우화조건하,가체30%.표체산물적가용성명현제고(재90%이상),기상대분자질량(Mr)여예기적상부,순화후적순도체90%이상.결론실현료HuC Ⅱ 250～270적고효표체,위연구류풍습성관절염적발병궤제화치료제공료실험의거.위재원핵세포중고효표체적효원단백적공능성소편단,제공료가공삼고적차감.
