口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测
구제역병독NSP 3ABC기인재곤충세포중적분비표체급기활성검측
Secreted Expression of Nonstructural Protein Gene 3 ABC of Foot-and-Mouth Disease Virus in Sf9 Cells and Activity Analysis
  • 万方数据
    生物工程学报 생물공정학보
    CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
    2007年 3期 540-545 ,共6页

    马江涛%卢曾军%曹轶梅%郭慧琛%郭建宏%祝秀梅%杨孝朴%刘在新

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    口蹄疫病毒%3ABC基因%杆状病毒%分泌性表达 口蹄疫病毒%3ABC基因%桿狀病毒%分泌性錶達
    구제역병독%3ABC기인%간상병독%분비성표체
    用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC.将该重组质粒与杆状病毒骨架DNA Bac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了舍有目的基因的重组杆状病毒.重组病毒感染Sf9昆虫细胞.采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性.表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应.该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础.
    용설계적특이인물,확증득도료N-단대유6×His편마서렬적구제역병독완정3ABC기인서렬,병장기아극륭입대유봉독용혈태서렬적천사질립pMelBac-B중,구건료중조질립pMel-3ABC.장해중조질립여간상병독골가DNA Bac-N-BlueTM공전염Sf9곤충세포,통과서반사선화PCR감정,획득료사유목적기인적중조간상병독.중조병독감염Sf9곤충세포.채용통과SDS-PAGE화Western blot검측,증명목적기인재곤충세포중득도료정학적표체,표체산물분비지세포배양상청중,병구유량호적생물활성.표체적목적단백경과얼주친화층석법순화후,용간접ELISA방법검측여구제역병독감염동물혈청적반응성,증명표체목적단백여감염동물혈청유흔호적반응성이여정상동물이급면역동물혈청불발생반응.해연구위건립일충경가민감화특이적구제역병독감염동물여역묘면역동물적감별진단방법전정료기출.
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