广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2007年
9期
1420-1421
,共2页
结核分支杆菌(MTB)%LprG基因%克隆%表达%纯化
結覈分支桿菌(MTB)%LprG基因%剋隆%錶達%純化
결핵분지간균(MTB)%LprG기인%극륭%표체%순화
目的 在大肠杆菌中重组表达MTB LprG基因,纯化回收,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础.方法 从MTB H37Pv基因组中PCR扩增出MTB LprG基因,克隆到pEASY T1载体中,经序列测定后,再亚克隆到表达载体pET28a(+)中,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Western-blot分析鉴定,采用Ni-NTA柱纯代LprG蛋白.结果 扩增产物序列无突变,重组表达载体pET28a(+)-LprG酶切鉴定正确,LprG蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白的38%左右,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析在27 kDa处见到目的蛋白条带,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度较高的该蛋白.结论 构建了LprG基因的重组表达载体,获得了纯化的蛋白,为以后研究奠定了基础.
目的 在大腸桿菌中重組錶達MTB LprG基因,純化迴收,為進一步研究其在結覈病診斷中的價值奠定基礎.方法 從MTB H37Pv基因組中PCR擴增齣MTB LprG基因,剋隆到pEASY T1載體中,經序列測定後,再亞剋隆到錶達載體pET28a(+)中,轉化入E.coli BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,Western-blot分析鑒定,採用Ni-NTA柱純代LprG蛋白.結果 擴增產物序列無突變,重組錶達載體pET28a(+)-LprG酶切鑒定正確,LprG蛋白在E.coli BL21(DE3)中的錶達量約佔菌體總蛋白的38%左右,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析在27 kDa處見到目的蛋白條帶,經Ni-NTA柱純化後,得到純度較高的該蛋白.結論 構建瞭LprG基因的重組錶達載體,穫得瞭純化的蛋白,為以後研究奠定瞭基礎.
목적 재대장간균중중조표체MTB LprG기인,순화회수,위진일보연구기재결핵병진단중적개치전정기출.방법 종MTB H37Pv기인조중PCR확증출MTB LprG기인,극륭도pEASY T1재체중,경서렬측정후,재아극륭도표체재체pET28a(+)중,전화입E.coli BL21(DE3),경IPTG유도표체,Western-blot분석감정,채용Ni-NTA주순대LprG단백.결과 확증산물서렬무돌변,중조표체재체pET28a(+)-LprG매절감정정학,LprG단백재E.coli BL21(DE3)중적표체량약점균체총단백적38%좌우,주요이가용성형식존재,Western-blot분석재27 kDa처견도목적단백조대,경Ni-NTA주순화후,득도순도교고적해단백.결론 구건료LprG기인적중조표체재체,획득료순화적단백,위이후연구전정료기출.
