CAJ | 학술논문

长散布重复序列-1(Line-1,LI)是重要的人类基因组成分,完整的L1有6 kb,在基因组中存在的L1多数是不完整序列,有必要研究L1片段对基因表达的调控作用.PCR扩增L1第二读码框(L1-ORF2)不同位置的280 bp片段,共7段,同向8串联按正、反方向分别插入pEGFP质粒GFP基因下游,观察插入序列对GFP报告基因表达的影响.构建的质粒瞬时转染HeLa细胞,经荧光显微镜和Northern检测,不同片段对转录量和终止影响不同.7个片段正序对GFP报告基因的抑制均高于其反序,在正序串联表达载体p280-1*8和p280-9*8的GFP基因转录量超过其他280正序插入片段,在反序串联表达载体p280-1*8as和p280.9*8as的GFP基因转录量超过其他280反序片段.280-1*8、280-9*8、280-1*8as和280-9*8as属于转录终止性序列.Alu在基因组的多数区段与L1分布呈反比,Alu正,反序均对GFP表达有抑制作用,但反序抑制作用高于正序,Alu正序属于转录延伸性序列.280 bp片段反序插入的所有质粒荧光阳性细胞均高于正序插入质粒.经碱基分析,L1-ORF2各段均存在A碱基含量多,T碱基含量少的现象,这可能是其正、反序对基因表达影响不同的原因.
장산포중복서렬-1(Line-1,LI)시중요적인류기인조성분,완정적L1유6 kb,재기인조중존재적L1다수시불완정서렬,유필요연구L1편단대기인표체적조공작용.PCR확증L1제이독마광(L1-ORF2)불동위치적280 bp편단,공7단,동향8천련안정、반방향분별삽입pEGFP질립GFP기인하유,관찰삽입서렬대GFP보고기인표체적영향.구건적질립순시전염HeLa세포,경형광현미경화Northern검측,불동편단대전록량화종지영향불동.7개편단정서대GFP보고기인적억제균고우기반서,재정서천련표체재체p280-1*8화p280-9*8적GFP기인전록량초과기타280정서삽입편단,재반서천련표체재체p280-1*8as화p280.9*8as적GFP기인전록량초과기타280반서편단.280-1*8、280-9*8、280-1*8as화280-9*8as속우전록종지성서렬.Alu재기인조적다수구단여L1분포정반비,Alu정,반서균대GFP표체유억제작용,단반서억제작용고우정서,Alu정서속우전록연신성서렬.280 bp편단반서삽입적소유질립형광양성세포균고우정서삽입질립.경감기분석,L1-ORF2각단균존재A감기함량다,T감기함량소적현상,저가능시기정、반서대기인표체영향불동적원인.