CAJ | 학술논문

为构建可溶性鸡组织相容性复合体(MHC) Ⅰ类分子(BF2)/肽复合物,大量表达并纯化了可生物素化的MHC Ⅰ类分子重链(BF2-BSP)和轻链(Chβ2m),并合成了鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核蛋白N71～78T细胞表位肽,将其与纯化后的重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m在重折叠缓冲液中复性.复性后在快速蛋白液相色谱仪(FPLC)上分离出复性组装成功的BF2/肽单体复合物.将该单体复合物在体外进行生物素化,其产物再次采用FPLC通过分子筛分离出生物素化后的BF2/肽单体复合物;然后将生物素化后的BF2/肽单体复合物与藻红蛋白(PE)标记的链霉亲和素按一定比例反应生成BF2/肽四聚体.为了检测所制备BF2/肽四聚体是否能应用于检测特异性T细胞,从感染IBV H52株10 d后的SPF鸡分离外周血单核细胞(PBMC),染色后采用流式细胞术检测,结果表明,所制备的BF2/肽四聚体可用于检测IBVN蛋白特异性T淋巴细胞,检测1周龄SPF鸡接种H52后10d时针对N蛋白的特异性T细胞比率为3.65%.
위구건가용성계조직상용성복합체(MHC) Ⅰ류분자(BF2)/태복합물,대량표체병순화료가생물소화적MHC Ⅰ류분자중련(BF2-BSP)화경련(Chβ2m),병합성료계전염성지기관염병독(IBV)핵단백N71～78T세포표위태,장기여순화후적중조단백BF2-BSP화Chβ2m재중절첩완충액중복성.복성후재쾌속단백액상색보의(FPLC)상분리출복성조장성공적BF2/태단체복합물.장해단체복합물재체외진행생물소화,기산물재차채용FPLC통과분자사분리출생물소화후적BF2/태단체복합물;연후장생물소화후적BF2/태단체복합물여조홍단백(PE)표기적련매친화소안일정비례반응생성BF2/태사취체.위료검측소제비BF2/태사취체시부능응용우검측특이성T세포,종감염IBV H52주10 d후적SPF계분리외주혈단핵세포(PBMC),염색후채용류식세포술검측,결과표명,소제비적BF2/태사취체가용우검측IBVN단백특이성T림파세포,검측1주령SPF계접충H52후10d시침대N단백적특이성T세포비솔위3.65%.