生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
7期
923-928
,共6页
邹秉杰%罗娟%武海萍%周国华
鄒秉傑%囉娟%武海萍%週國華
추병걸%라연%무해평%주국화
ATP硫酸化酶%生物素化%固定化%焦测序
ATP硫痠化酶%生物素化%固定化%焦測序
ATP류산화매%생물소화%고정화%초측서
现代大规模焦测序技术的产生是DNA测序技术的一次革命,其关键技术之一是得到高活性的、固定于磁性微球表面的ATP硫酸化酶.生物素化的ATP硫酸化酶可以通过生物素与亲和素之间的特异结合特性固定在包被亲和素的磁性微球表面,但是利用化学修饰法将ATP硫酸化酶进行生物素化修饰很可能会影响酶的活性.利用融介表达策略,将大肠杆菌生物素酰基载体蛋白C端87个氨基酸肽段(BCCP87)与ATP硫酸化酶在大肠杆菌内融合表达,经SDS-PAGE和Western blot分析,表达的融合蛋白分子质量约为64 ku,并儿能够在大肠杆菌内被生物素化.生物素化的ATP硫酸化酶能够与亲和素包被的磁珠结合,固定后的ATP硫酸化酶具有活性,并且能够用于定量检测焦磷酸盐(PPi)和焦测序,为今后建立高通量大规模焦测序系统提供一个有效的工具酶.
現代大規模焦測序技術的產生是DNA測序技術的一次革命,其關鍵技術之一是得到高活性的、固定于磁性微毬錶麵的ATP硫痠化酶.生物素化的ATP硫痠化酶可以通過生物素與親和素之間的特異結閤特性固定在包被親和素的磁性微毬錶麵,但是利用化學脩飾法將ATP硫痠化酶進行生物素化脩飾很可能會影響酶的活性.利用融介錶達策略,將大腸桿菌生物素酰基載體蛋白C耑87箇氨基痠肽段(BCCP87)與ATP硫痠化酶在大腸桿菌內融閤錶達,經SDS-PAGE和Western blot分析,錶達的融閤蛋白分子質量約為64 ku,併兒能夠在大腸桿菌內被生物素化.生物素化的ATP硫痠化酶能夠與親和素包被的磁珠結閤,固定後的ATP硫痠化酶具有活性,併且能夠用于定量檢測焦燐痠鹽(PPi)和焦測序,為今後建立高通量大規模焦測序繫統提供一箇有效的工具酶.
현대대규모초측서기술적산생시DNA측서기술적일차혁명,기관건기술지일시득도고활성적、고정우자성미구표면적ATP류산화매.생물소화적ATP류산화매가이통과생물소여친화소지간적특이결합특성고정재포피친화소적자성미구표면,단시이용화학수식법장ATP류산화매진행생물소화수식흔가능회영향매적활성.이용융개표체책략,장대장간균생물소선기재체단백C단87개안기산태단(BCCP87)여ATP류산화매재대장간균내융합표체,경SDS-PAGE화Western blot분석,표체적융합단백분자질량약위64 ku,병인능구재대장간균내피생물소화.생물소화적ATP류산화매능구여친화소포피적자주결합,고정후적ATP류산화매구유활성,병차능구용우정량검측초린산염(PPi)화초측서,위금후건립고통량대규모초측서계통제공일개유효적공구매.
