CAJ | 학술논문

通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory SyndromeVirus,HP-PRRSV)HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2(Nonstndural protein 2)蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变,针对每个突变点分别人工合成编码短肽的核苷酸序列,经原核表达后进行Western blot分析.结果表明表达的融合蛋白F65-11(749KGEPVDQPAK759)能够特异性的与HuN4-F40、HuN4-F65和HuN4-F112感染猪的血清发生反应,而与HuN4 F5感染猪的阳性血清和CH-1a株阳性血清不发生反应,证实第4个氨基酸点突变(S754)处存在一个免疫优势抗原表位.将该表位肽段由N端和C端逐步缩短继续鉴定,当N端缩短到第5个氨基酸(754SDQPAK759)C端缩短到第3个氨基酸(749KGEPVSDQ757)时,表达的融合蛋白不能与PRRSV阳性血清反应,最终推测该抗原表位必需氨基酸为753VSDQ756.选取GenBank中提交的部分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的Nsp2氨基酸序列,对该表位氨基酸所在位置进行序列比较,分析结果显示位于Nsp2蛋白749→759位氨基酸序列高度保守,F65-11变异位点C754→S754为HuN4株系列传代毒株所特有.本研究结果证实抗原表位F65-11可以作为鉴别HuN4-F112弱毒疫苗所诱导产生的特异性抗体的候选抗原.
통과대고치병성저번식여호흡종합정병독(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory SyndromeVirus,HP-PRRSV)HuN4주친본독급기불동대차전대독주Nsp2(Nonstndural protein 2)단백안기산서렬비교분석,발현불동대차적Nsp2단백존재4처안기산점돌변,침대매개돌변점분별인공합성편마단태적핵감산서렬,경원핵표체후진행Western blot분석.결과표명표체적융합단백F65-11(749KGEPVDQPAK759)능구특이성적여HuN4-F40、HuN4-F65화HuN4-F112감염저적혈청발생반응,이여HuN4 F5감염저적양성혈청화CH-1a주양성혈청불발생반응,증실제4개안기산점돌변(S754)처존재일개면역우세항원표위.장해표위태단유N단화C단축보축단계속감정,당N단축단도제5개안기산(754SDQPAK759)C단축단도제3개안기산(749KGEPVSDQ757)시,표체적융합단백불능여PRRSV양성혈청반응,최종추측해항원표위필수안기산위753VSDQ756.선취GenBank중제교적부분고치병성저번식여호흡종합정병독적Nsp2안기산서렬,대해표위안기산소재위치진행서렬비교,분석결과현시위우Nsp2단백749→759위안기산서렬고도보수,F65-11변이위점C754→S754위HuN4주계열전대독주소특유.본연구결과증실항원표위F65-11가이작위감별HuN4-F112약독역묘소유도산생적특이성항체적후선항원.