四川医学
四川醫學
사천의학
SICHUAN MEDICAL JOURNAL
2009年
11期
1687-1689
,共3页
郑雪莲%辜俊%赵献峰%史洵玮%何海宁%孙红%钟应佳
鄭雪蓮%辜俊%趙獻峰%史洵瑋%何海寧%孫紅%鐘應佳
정설련%고준%조헌봉%사순위%하해저%손홍%종응가
椎间盘组织%Ⅱ型胶原酶%RNA提取
椎間盤組織%Ⅱ型膠原酶%RNA提取
추간반조직%Ⅱ형효원매%RNA제취
目的 改进传统常规法在椎间盘组织中总RNA提取,获得高质量的椎间盘组织总RNA.方法 健康成年Newsland白兔,完整取出椎间盘组织,随机分RNA传统方法组和酶消化改良组.传统组,按Trizol法提取总RNA;酶消化改良组,加入0.2%Ⅱ型胶原酶,置于细胞培养葙消化数小时,加入含小牛血清的PBS液终止,离心收集细胞.余步骤同传统组.结果 传统组,电泳结果未见28S和18S条带,5S条带部分可见;A260/280比值在1.5左右,蛋白多糖污染重.而酶消化组,电泳结果可见清晰的28S、18S和5S条带,且28S条带的亮度约是18S的两倍;3.260/280比值在1.8～2,0之间,无蛋白污染,此法提取的RNA,逆转录后可用于扩增β-actin基因.结论 酶消化改良法可望成为椎间盘组织总RNA提取的好方法.RNA片断完整,纯度高,无蛋白污染,不影响后续基因表达(RT-PCR)的分析,并且重复性好,可以推广.
目的 改進傳統常規法在椎間盤組織中總RNA提取,穫得高質量的椎間盤組織總RNA.方法 健康成年Newsland白兔,完整取齣椎間盤組織,隨機分RNA傳統方法組和酶消化改良組.傳統組,按Trizol法提取總RNA;酶消化改良組,加入0.2%Ⅱ型膠原酶,置于細胞培養葙消化數小時,加入含小牛血清的PBS液終止,離心收集細胞.餘步驟同傳統組.結果 傳統組,電泳結果未見28S和18S條帶,5S條帶部分可見;A260/280比值在1.5左右,蛋白多糖汙染重.而酶消化組,電泳結果可見清晰的28S、18S和5S條帶,且28S條帶的亮度約是18S的兩倍;3.260/280比值在1.8～2,0之間,無蛋白汙染,此法提取的RNA,逆轉錄後可用于擴增β-actin基因.結論 酶消化改良法可望成為椎間盤組織總RNA提取的好方法.RNA片斷完整,純度高,無蛋白汙染,不影響後續基因錶達(RT-PCR)的分析,併且重複性好,可以推廣.
목적 개진전통상규법재추간반조직중총RNA제취,획득고질량적추간반조직총RNA.방법 건강성년Newsland백토,완정취출추간반조직,수궤분RNA전통방법조화매소화개량조.전통조,안Trizol법제취총RNA;매소화개량조,가입0.2%Ⅱ형효원매,치우세포배양상소화수소시,가입함소우혈청적PBS액종지,리심수집세포.여보취동전통조.결과 전통조,전영결과미견28S화18S조대,5S조대부분가견;A260/280비치재1.5좌우,단백다당오염중.이매소화조,전영결과가견청석적28S、18S화5S조대,차28S조대적량도약시18S적량배;3.260/280비치재1.8～2,0지간,무단백오염,차법제취적RNA,역전록후가용우확증β-actin기인.결론 매소화개량법가망성위추간반조직총RNA제취적호방법.RNA편단완정,순도고,무단백오염,불영향후속기인표체(RT-PCR)적분석,병차중복성호,가이추엄.
