中国男科学杂志
中國男科學雜誌
중국남과학잡지
CHINESE JOURNAL OF ANDROLOGY
2010年
8期
6-9
,共4页
汤育新%蒋先镇%文甲明%陈厚仰%阳建福%肖小旺%戴英波
湯育新%蔣先鎮%文甲明%陳厚仰%暘建福%肖小旺%戴英波
탕육신%장선진%문갑명%진후앙%양건복%초소왕%대영파
TDRG1基因%克隆%真核载体%基因转染
TDRG1基因%剋隆%真覈載體%基因轉染
TDRG1기인%극륭%진핵재체%기인전염
目的 构建人睾丸基因TDRGl的真核表达质粒,并研究其表达.方法 取人新鲜正常睾丸组织,提取总RNA,采用逆转录.聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增TDRG1基因编码序列;将该基因克隆到真核表达载体pYD5中,构建真核细胞表达载体pYD5-TDRG1,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的重组质粒pYD5-TDRG1在脂质体介导下转染293细胞,间接免疫荧光法和Western Blot法鉴定目的 蛋白质的表达.结果 RT-PCR扩增出TDRGl基因编码序列,目的 插入片段长约303bp:产物行限制性内切酶酶切后连接到真核表达载体pYD5,重组质粒pYD5-TDRG1经酶切及DNA测序鉴定构建成功:该质粒转染293细胞48h后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,阳性细胞率96.42%;行Western blot分析检测到约39-8kD的目的 蛋白表达.结论 成功构建了人类睾丸基因TDRG1的真核表达载体pYD5-TDRG1,TDRG1基因在293细胞内成功表达.
目的 構建人睪汍基因TDRGl的真覈錶達質粒,併研究其錶達.方法 取人新鮮正常睪汍組織,提取總RNA,採用逆轉錄.聚閤酶聯鏈反應(RT-PCR)擴增TDRG1基因編碼序列;將該基因剋隆到真覈錶達載體pYD5中,構建真覈細胞錶達載體pYD5-TDRG1,用限製性內切酶酶切分析,DNA序列分析鑒定重組質粒;將測序正確的重組質粒pYD5-TDRG1在脂質體介導下轉染293細胞,間接免疫熒光法和Western Blot法鑒定目的 蛋白質的錶達.結果 RT-PCR擴增齣TDRGl基因編碼序列,目的 插入片段長約303bp:產物行限製性內切酶酶切後連接到真覈錶達載體pYD5,重組質粒pYD5-TDRG1經酶切及DNA測序鑒定構建成功:該質粒轉染293細胞48h後在熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光,暘性細胞率96.42%;行Western blot分析檢測到約39-8kD的目的 蛋白錶達.結論 成功構建瞭人類睪汍基因TDRG1的真覈錶達載體pYD5-TDRG1,TDRG1基因在293細胞內成功錶達.
목적 구건인고환기인TDRGl적진핵표체질립,병연구기표체.방법 취인신선정상고환조직,제취총RNA,채용역전록.취합매련련반응(RT-PCR)확증TDRG1기인편마서렬;장해기인극륭도진핵표체재체pYD5중,구건진핵세포표체재체pYD5-TDRG1,용한제성내절매매절분석,DNA서렬분석감정중조질립;장측서정학적중조질립pYD5-TDRG1재지질체개도하전염293세포,간접면역형광법화Western Blot법감정목적 단백질적표체.결과 RT-PCR확증출TDRGl기인편마서렬,목적 삽입편단장약303bp:산물행한제성내절매매절후련접도진핵표체재체pYD5,중조질립pYD5-TDRG1경매절급DNA측서감정구건성공:해질립전염293세포48h후재형광현미경하가관찰도록색형광,양성세포솔96.42%;행Western blot분석검측도약39-8kD적목적 단백표체.결론 성공구건료인류고환기인TDRG1적진핵표체재체pYD5-TDRG1,TDRG1기인재293세포내성공표체.
