CAJ | 학술논문

本研究旨在探讨鸡胚盲肠上皮细胞传代培养条件及其特性,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型.分别用胰酶-EDTA联合消化和分步消化2种方法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定贴壁细胞覆盖率选择细胞传代的适宜消化方式;筛选了传代细胞培养液中L-GLN和胰岛素的最佳浓度,通过贴壁差进一步纯化盲肠上皮细胞,探索其合适的培养条件.通过形态学观察、透射电镜、免疫组织化学技术、组织化学技术、糖原染色、流式细胞术的方法对传代细胞特性进行了鉴定.结果表明:胰酶-EDTA联合消化、15 min贴壁差纯化除去成纤维细胞,72.5 mg·L-1L-GLN、0.05 mg·L-1胰岛素和5%FBS的传代细胞培养液更有利于盲肠上皮细胞的生长;经形态学和透射电镜观察,AKP、Vimentin及PAS染色,所培养的传代细胞具有典型的上皮细胞特征,在传代后24～72 h盲肠上皮细胞纯度达95%以上,贴壁细胞覆盖率达85%以上;细胞凋亡测定表明,细胞连传5代,活性较好,第6代细胞凋亡率显著增加,贴壁细胞覆盖率降低.本研究提示用该法传代可获得稳定、数量大、活性高、纯度高的鸡胚盲肠上皮细胞.
본연구지재탐토계배맹장상피세포전대배양조건급기특성,위E.tenella손상궤제급항구충약적연구제공체외모형.분별용이매-EDTA연합소화화분보소화2충방법분리순화원대계배맹장상피세포,통과측정첩벽세포복개솔선택세포전대적괄의소화방식;사선료전대세포배양액중L-GLN화이도소적최가농도,통과첩벽차진일보순화맹장상피세포,탐색기합괄적배양조건.통과형태학관찰、투사전경、면역조직화학기술、조직화학기술、당원염색、류식세포술적방법대전대세포특성진행료감정.결과표명:이매-EDTA연합소화、15 min첩벽차순화제거성섬유세포,72.5 mg·L-1L-GLN、0.05 mg·L-1이도소화5%FBS적전대세포배양액경유리우맹장상피세포적생장;경형태학화투사전경관찰,AKP、Vimentin급PAS염색,소배양적전대세포구유전형적상피세포특정,재전대후24～72 h맹장상피세포순도체95%이상,첩벽세포복개솔체85%이상;세포조망측정표명,세포련전5대,활성교호,제6대세포조망솔현저증가,첩벽세포복개솔강저.본연구제시용해법전대가획득은정、수량대、활성고、순도고적계배맹장상피세포.