北方园艺
北方園藝
북방완예
NORTHERN HORTICULTURE
2011年
20期
128-131
,共4页
李亚菲%何鸿举%吕茜%樊明涛
李亞菲%何鴻舉%呂茜%樊明濤
리아비%하홍거%려천%번명도
扩展青霉菌%DNA提取%氯化苄法%蜗牛酶法%SDS法%CTAB法%异硫氰酸胍法
擴展青黴菌%DNA提取%氯化芐法%蝸牛酶法%SDS法%CTAB法%異硫氰痠胍法
확전청매균%DNA제취%록화변법%와우매법%SDS법%CTAB법%이류청산고법
为寻找一种适合于扩展青霉基因组DNA的提取方法,比较了固体培养、液体静置培养和液体振荡培养3种培养方式的提取效果,分别采用氯化苄法、蜗牛酶法、CTAB法、SDS法及异硫氰酸胍法提取扩展青霉菌基因组DNA,经DNA质量浓度测定及电泳分析,比较5种方法的差异,并利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)基因内一段保守序列,设计PCR引物,扩增大小为288 bp的特异目的基因,检测其灵敏性.结果表明:固体培养的方式较适合扩展青霉基因组DNA的提取,另外5种提取方法均能提取出扩展青霉菌基因组DNA,扩增出目的条带,其中氯化苄法和蜗牛酶法所提DNA的纯度均较好,但蜗牛酶法所提DNA量较少.因此,氯化苄法是5种提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA浓度高、纯度好、结果稳定,可作为PCR反应的模板进行特异性扩增,且该方法的最低检测限大约为1.01×10-1μg/mL.
為尋找一種適閤于擴展青黴基因組DNA的提取方法,比較瞭固體培養、液體靜置培養和液體振盪培養3種培養方式的提取效果,分彆採用氯化芐法、蝸牛酶法、CTAB法、SDS法及異硫氰痠胍法提取擴展青黴菌基因組DNA,經DNA質量濃度測定及電泳分析,比較5種方法的差異,併利用擴展青黴的多聚半乳糖醛痠酶(Polygalacturonase)基因內一段保守序列,設計PCR引物,擴增大小為288 bp的特異目的基因,檢測其靈敏性.結果錶明:固體培養的方式較適閤擴展青黴基因組DNA的提取,另外5種提取方法均能提取齣擴展青黴菌基因組DNA,擴增齣目的條帶,其中氯化芐法和蝸牛酶法所提DNA的純度均較好,但蝸牛酶法所提DNA量較少.因此,氯化芐法是5種提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA濃度高、純度好、結果穩定,可作為PCR反應的模闆進行特異性擴增,且該方法的最低檢測限大約為1.01×10-1μg/mL.
위심조일충괄합우확전청매기인조DNA적제취방법,비교료고체배양、액체정치배양화액체진탕배양3충배양방식적제취효과,분별채용록화변법、와우매법、CTAB법、SDS법급이류청산고법제취확전청매균기인조DNA,경DNA질량농도측정급전영분석,비교5충방법적차이,병이용확전청매적다취반유당철산매(Polygalacturonase)기인내일단보수서렬,설계PCR인물,확증대소위288 bp적특이목적기인,검측기령민성.결과표명:고체배양적방식교괄합확전청매기인조DNA적제취,령외5충제취방법균능제취출확전청매균기인조DNA,확증출목적조대,기중록화변법화와우매법소제DNA적순도균교호,단와우매법소제DNA량교소.인차,록화변법시5충제취방법중최가고적DNA제취방법,소제DNA농도고、순도호、결과은정,가작위PCR반응적모판진행특이성확증,차해방법적최저검측한대약위1.01×10-1μg/mL.
