中华损伤与修复杂志（电子版）
中華損傷與脩複雜誌（電子版）
중화손상여수복잡지（전자판）
Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing
2012年
4期
346-350
,共5页
白晓智%张战凤%陶克%石继红%李小强%朱雄翔%汤朝武
白曉智%張戰鳳%陶剋%石繼紅%李小彊%硃雄翔%湯朝武
백효지%장전봉%도극%석계홍%리소강%주웅상%탕조무
组织工程%表皮生长因子%HaCaT细胞%基因转染%生物特性
組織工程%錶皮生長因子%HaCaT細胞%基因轉染%生物特性
조직공정%표피생장인자%HaCaT세포%기인전염%생물특성
目的 构建稳定表达人表皮生长因子(EGF)的人永生化角质形成细胞HaCaT细胞株,分析其生物学特性的变化.方法 将pcDNA3.1-EGF真核表达载体转入HaCaT细胞,经G418工作液筛选获得稳定表达、分泌EGF的HaCaT-EGF细胞株,同时按照同样步骤将pcDNA3.1空质粒转入HaCaT细胞.分别采用倒置显微镜、PCR仪、ELISA法检测细胞形态变化、EGF的基因和蛋白表达情况,同时对凋亡相关分子Caspase-3、细胞周期相关蛋白分子cyclin D1的mRNA表达水平进行检测分析.结果 获得了一HaCaT-EGF细胞株,经检测,HaCaT-EGF细胞株EGF mRNA表达水平为正常HaCaT细胞的147倍,EGF蛋白分泌高达(387.030±25.680)pg/mL.HaCaT-EGF细胞株与空载体转染HaCaT细胞及正常HaCaT细胞相比,细胞集落更加集中和紧密;HaCaT-EGF Caspase-3 mRNA相对表达量低于空载体转染HaCaT细胞,差异具有高度统计学意义(t= 5.110,P=0.006),与正常HaCaT细胞比较差异无统计学意义(t=3.180,P=0.082);HaCaT-EGF细胞周期相关蛋白cyclin D1 mRNA相对表达量低于空载体组,差异有高度统计学意义(t= 9.442,P<0.01),与正常HaCaT细胞比较差异无统计学意义(t=2.831,P=0.066).结论 HaCaT-EGF细胞株可持续分泌EGF,与正常HaCaT细胞及HaCaT空载体细胞相比,HaCaT-EGF细胞生长旺盛,细胞集落更加集中和紧密,是组织工程皮肤构建的良好种子细胞,可用于组织工程相关实验研究.
目的 構建穩定錶達人錶皮生長因子(EGF)的人永生化角質形成細胞HaCaT細胞株,分析其生物學特性的變化.方法 將pcDNA3.1-EGF真覈錶達載體轉入HaCaT細胞,經G418工作液篩選穫得穩定錶達、分泌EGF的HaCaT-EGF細胞株,同時按照同樣步驟將pcDNA3.1空質粒轉入HaCaT細胞.分彆採用倒置顯微鏡、PCR儀、ELISA法檢測細胞形態變化、EGF的基因和蛋白錶達情況,同時對凋亡相關分子Caspase-3、細胞週期相關蛋白分子cyclin D1的mRNA錶達水平進行檢測分析.結果 穫得瞭一HaCaT-EGF細胞株,經檢測,HaCaT-EGF細胞株EGF mRNA錶達水平為正常HaCaT細胞的147倍,EGF蛋白分泌高達(387.030±25.680)pg/mL.HaCaT-EGF細胞株與空載體轉染HaCaT細胞及正常HaCaT細胞相比,細胞集落更加集中和緊密;HaCaT-EGF Caspase-3 mRNA相對錶達量低于空載體轉染HaCaT細胞,差異具有高度統計學意義(t= 5.110,P=0.006),與正常HaCaT細胞比較差異無統計學意義(t=3.180,P=0.082);HaCaT-EGF細胞週期相關蛋白cyclin D1 mRNA相對錶達量低于空載體組,差異有高度統計學意義(t= 9.442,P<0.01),與正常HaCaT細胞比較差異無統計學意義(t=2.831,P=0.066).結論 HaCaT-EGF細胞株可持續分泌EGF,與正常HaCaT細胞及HaCaT空載體細胞相比,HaCaT-EGF細胞生長旺盛,細胞集落更加集中和緊密,是組織工程皮膚構建的良好種子細胞,可用于組織工程相關實驗研究.
목적 구건은정표체인표피생장인자(EGF)적인영생화각질형성세포HaCaT세포주,분석기생물학특성적변화.방법 장pcDNA3.1-EGF진핵표체재체전입HaCaT세포,경G418공작액사선획득은정표체、분비EGF적HaCaT-EGF세포주,동시안조동양보취장pcDNA3.1공질립전입HaCaT세포.분별채용도치현미경、PCR의、ELISA법검측세포형태변화、EGF적기인화단백표체정황,동시대조망상관분자Caspase-3、세포주기상관단백분자cyclin D1적mRNA표체수평진행검측분석.결과 획득료일HaCaT-EGF세포주,경검측,HaCaT-EGF세포주EGF mRNA표체수평위정상HaCaT세포적147배,EGF단백분비고체(387.030±25.680)pg/mL.HaCaT-EGF세포주여공재체전염HaCaT세포급정상HaCaT세포상비,세포집락경가집중화긴밀;HaCaT-EGF Caspase-3 mRNA상대표체량저우공재체전염HaCaT세포,차이구유고도통계학의의(t= 5.110,P=0.006),여정상HaCaT세포비교차이무통계학의의(t=3.180,P=0.082);HaCaT-EGF세포주기상관단백cyclin D1 mRNA상대표체량저우공재체조,차이유고도통계학의의(t= 9.442,P<0.01),여정상HaCaT세포비교차이무통계학의의(t=2.831,P=0.066).결론 HaCaT-EGF세포주가지속분비EGF,여정상HaCaT세포급HaCaT공재체세포상비,HaCaT-EGF세포생장왕성,세포집락경가집중화긴밀,시조직공정피부구건적량호충자세포,가용우조직공정상관실험연구.
