中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2007年
3期
166-169
,共4页
崔大伟%王伟%周小林%谷娟娟%崔梅萍
崔大偉%王偉%週小林%穀娟娟%崔梅萍
최대위%왕위%주소림%곡연연%최매평
肌红蛋白%基因克隆%原核表达%多克隆抗体
肌紅蛋白%基因剋隆%原覈錶達%多剋隆抗體
기홍단백%기인극륭%원핵표체%다극륭항체
目的 克隆、表达人肌红蛋白基因,并制备人肌红蛋白多克隆抗体.方法 应用RT-PCR方法从人骨骼肌总RNA中扩增肌红蛋白基因(hMb)编码序列,克隆入原核表达载体pRSETc中,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达.表达产物经亲和层析和凝胶层析纯化.纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,并用Western blot检测其特异性.结果 测序表明RT-PCR所得的肌红蛋白基因hMb序列与GenBank(NM203377)中报道的序列一致.该基因在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化,获得电泳纯的蛋白.重组人肌红蛋白的表达水平达12.8%.每升发酵液中可获得纯化的目的蛋白6.438 mg.Western blot分析表明该蛋白为融合有6个His的hMb蛋白.ELISA法测得抗体效价为1∶ 12 800,Western blot证实其具有较好的特异性.结论 已成功克隆人肌红蛋白基因,在大肠杆菌中获得了可溶性表达,并制备了抗人肌红蛋白的多克隆抗体.
目的 剋隆、錶達人肌紅蛋白基因,併製備人肌紅蛋白多剋隆抗體.方法 應用RT-PCR方法從人骨骼肌總RNA中擴增肌紅蛋白基因(hMb)編碼序列,剋隆入原覈錶達載體pRSETc中,併在大腸桿菌E.coli BL21(DE3)中誘導錶達.錶達產物經親和層析和凝膠層析純化.純化蛋白免疫小鼠,製備多剋隆抗體,併用Western blot檢測其特異性.結果 測序錶明RT-PCR所得的肌紅蛋白基因hMb序列與GenBank(NM203377)中報道的序列一緻.該基因在大腸桿菌E.coli BL21(DE3)中穫得高效可溶性錶達,錶達產物經純化,穫得電泳純的蛋白.重組人肌紅蛋白的錶達水平達12.8%.每升髮酵液中可穫得純化的目的蛋白6.438 mg.Western blot分析錶明該蛋白為融閤有6箇His的hMb蛋白.ELISA法測得抗體效價為1∶ 12 800,Western blot證實其具有較好的特異性.結論 已成功剋隆人肌紅蛋白基因,在大腸桿菌中穫得瞭可溶性錶達,併製備瞭抗人肌紅蛋白的多剋隆抗體.
목적 극륭、표체인기홍단백기인,병제비인기홍단백다극륭항체.방법 응용RT-PCR방법종인골격기총RNA중확증기홍단백기인(hMb)편마서렬,극륭입원핵표체재체pRSETc중,병재대장간균E.coli BL21(DE3)중유도표체.표체산물경친화층석화응효층석순화.순화단백면역소서,제비다극륭항체,병용Western blot검측기특이성.결과 측서표명RT-PCR소득적기홍단백기인hMb서렬여GenBank(NM203377)중보도적서렬일치.해기인재대장간균E.coli BL21(DE3)중획득고효가용성표체,표체산물경순화,획득전영순적단백.중조인기홍단백적표체수평체12.8%.매승발효액중가획득순화적목적단백6.438 mg.Western blot분석표명해단백위융합유6개His적hMb단백.ELISA법측득항체효개위1∶ 12 800,Western blot증실기구유교호적특이성.결론 이성공극륭인기홍단백기인,재대장간균중획득료가용성표체,병제비료항인기홍단백적다극륭항체.
