湖北农业科学
湖北農業科學
호북농업과학
2008年
6期
629-632
,共4页
韩增胜%李健%高大威%李青旺
韓增勝%李健%高大威%李青旺
한증성%리건%고대위%리청왕
重组人乳铁蛋白%腺病毒载体%重组蛋白质
重組人乳鐵蛋白%腺病毒載體%重組蛋白質
중조인유철단백%선병독재체%중조단백질
将人乳铁蛋白基因与腺病毒基因组骨架质粒重组,在293细胞中包装重组腺病毒颗粒,获得真核细胞表达的栽体pAd-hLTF.以pcDNA3X为模板,PCR扩增hLTF基因,腺病毒穿梭栽体pshuttle-cmv与hLTF重组为pshuttle-cmv-hLTF:再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组为pAd-hLTF质粒:脂质体法将重组pAd-hLTF质粒转染HEK 293细胞.包装成重组腺病毒颗粒.Western blot和ELISA法测定细胞中hLTF基因的表达.结果表明,pAd-hLTT质粒转染293细胞后,7～10 d后,获得细胞裂解液,将细胞裂解产物再次接种新鲜的293细胞,3～5 d后,80%以上的细胞变圆、膨胀、漂浮.Westem blot和ELISA结果显示,上清液中有hLTF基因的表达,为重组人乳铁蛋白的体外表达及其功能分析奠定了基础.
將人乳鐵蛋白基因與腺病毒基因組骨架質粒重組,在293細胞中包裝重組腺病毒顆粒,穫得真覈細胞錶達的栽體pAd-hLTF.以pcDNA3X為模闆,PCR擴增hLTF基因,腺病毒穿梭栽體pshuttle-cmv與hLTF重組為pshuttle-cmv-hLTF:再與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1同源重組為pAd-hLTF質粒:脂質體法將重組pAd-hLTF質粒轉染HEK 293細胞.包裝成重組腺病毒顆粒.Western blot和ELISA法測定細胞中hLTF基因的錶達.結果錶明,pAd-hLTT質粒轉染293細胞後,7～10 d後,穫得細胞裂解液,將細胞裂解產物再次接種新鮮的293細胞,3～5 d後,80%以上的細胞變圓、膨脹、漂浮.Westem blot和ELISA結果顯示,上清液中有hLTF基因的錶達,為重組人乳鐵蛋白的體外錶達及其功能分析奠定瞭基礎.
장인유철단백기인여선병독기인조골가질립중조,재293세포중포장중조선병독과립,획득진핵세포표체적재체pAd-hLTF.이pcDNA3X위모판,PCR확증hLTF기인,선병독천사재체pshuttle-cmv여hLTF중조위pshuttle-cmv-hLTF:재여선병독골가질립pAdEasy-1동원중조위pAd-hLTF질립:지질체법장중조pAd-hLTF질립전염HEK 293세포.포장성중조선병독과립.Western blot화ELISA법측정세포중hLTF기인적표체.결과표명,pAd-hLTT질립전염293세포후,7～10 d후,획득세포렬해액,장세포렬해산물재차접충신선적293세포,3～5 d후,80%이상적세포변원、팽창、표부.Westem blot화ELISA결과현시,상청액중유hLTF기인적표체,위중조인유철단백적체외표체급기공능분석전정료기출.
