CAJ | 학술논문

目的: 筛选、鉴定及验证植物乳酸杆菌CGMCC No. 1258表层黏附蛋白.方法: 用盐酸胍结合超速离心法提取表层膜蛋白, 通过HRP标记的黏蛋白作抗体Westernblot找到含有黏附蛋白的条带进行质谱分析,生物信息学的TPP软件分析获得可能的蛋白,进行蛋白的分段表达克隆, 并对纯化的蛋白用Western blot进行再次鉴定找到靶蛋白. 同时将黏蛋白连接的sepharose 4B柱提取菌体黏附蛋白, 通过制备的靶蛋白多克隆抗体对菌体黏附蛋白作Western blot进一步验证.结果: 表层蛋白提取后, 电泳及Western blot结果显示30-33 kDa处可及HRP标记的黏蛋白结合的阳性条带, 随后进行质谱及TPP分析获得的蛋白为: (1)A型GTP连接蛋白; (2)丙酮酸氧化酶; (3)细胞分裂激活蛋白; (4)整合膜蛋白;(5)后期能力蛋白. 并进行克隆表达及分段表达, 并在此后的Western blot鉴定中呈强阳性条带显示靶蛋白是整合膜蛋白的第2段. 在应用该靶蛋白制备的多克隆抗体进一步Westernblot验证试验中发现同菌体黏附蛋白相作用的强阳性条带.结论: 植物乳酸杆菌表层黏附蛋白为整合膜蛋白, 并且该蛋白的黏附区域位于其第2段氨基酸序列中.
목적: 사선、감정급험증식물유산간균CGMCC No. 1258표층점부단백.방법: 용염산고결합초속리심법제취표층막단백, 통과HRP표기적점단백작항체Westernblot조도함유점부단백적조대진행질보분석,생물신식학적TPP연건분석획득가능적단백,진행단백적분단표체극륭, 병대순화적단백용Western blot진행재차감정조도파단백. 동시장점단백련접적sepharose 4B주제취균체점부단백, 통과제비적파단백다극륭항체대균체점부단백작Western blot진일보험증.결과: 표층단백제취후, 전영급Western blot결과현시30-33 kDa처가급HRP표기적점단백결합적양성조대, 수후진행질보급TPP분석획득적단백위: (1)A형GTP련접단백; (2)병동산양화매; (3)세포분렬격활단백; (4)정합막단백;(5)후기능력단백. 병진행극륭표체급분단표체, 병재차후적Western blot감정중정강양성조대현시파단백시정합막단백적제2단. 재응용해파단백제비적다극륭항체진일보Westernblot험증시험중발현동균체점부단백상작용적강양성조대.결론: 식물유산간균표층점부단백위정합막단백, 병차해단백적점부구역위우기제2단안기산서렬중.