山西医药杂志
山西醫藥雜誌
산서의약잡지
SHANXI MEDICAL JOURNAL
2010年
1期
3-6
,共4页
卡介苗%疫苗%合成%抗结核药
卡介苗%疫苗%閤成%抗結覈藥
잡개묘%역묘%합성%항결핵약
目的 构建结核分枝杆菌esat6-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗.方法 通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原esat6的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用聚合酶链反应(PCR)扩增、聚丙烯酰胺凝胺电泳(PAGE)鉴定重组卡介苗.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数.通过观察esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果.结果 PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了esat6基因pYUB295重组质粒,ESAT6蛋白在卡介苗中分泌表达.重组卡介苗免疫原性试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组有ESAT6特异性抗体产生,45 d时达到最高水平.脾淋巴细胞增殖试验表明各组刺激指数均达2.0以上,esat6重组卡介苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高于对照组.预防试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率.其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果显著,与卡介苗组比有显著差异.结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变及脏器培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠比其他各组小鼠结核菌的负荷轻.抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组结果差异无统计学意义.结论 正确构建了esat6-卡介苗重组疫苗,esat6-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用.
目的 構建結覈分枝桿菌esat6-卡介苗重組疫苗,研究其免疫原性及抗結覈作用,以期穫得結覈病預防性或治療性疫苗.方法 通過基因工程重組技術將結覈分枝桿菌保護性抗原esat6的編碼基因與穿梭質粒載體pYUB295重組,採用電穿孔技術導入卡介苗中,應用聚閤酶鏈反應(PCR)擴增、聚丙烯酰胺凝胺電泳(PAGE)鑒定重組卡介苗.通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測其血清中特異性抗體,用MTS法分析其脾淋巴細胞增殖指數.通過觀察esat6-卡介苗重組疫苗對結覈分枝桿菌感染的預防試驗中實驗動物半數死亡時間、一定時間內的死亡率、大體病變、T細胞及B細胞免疫功能等指標評價esat6-卡介苗重組疫苗對結覈分枝桿菌感染的預防效果.結果 PCR擴增、限製性內切酶酶切、DNA測序鑒定、PAGE電泳錶明成功地構建瞭esat6基因pYUB295重組質粒,ESAT6蛋白在卡介苗中分泌錶達.重組卡介苗免疫原性試驗錶明:esat6-卡介苗重組疫苗組有ESAT6特異性抗體產生,45 d時達到最高水平.脾淋巴細胞增殖試驗錶明各組刺激指數均達2.0以上,esat6重組卡介苗免疫組小鼠脾淋巴細胞的刺激指數稍高于對照組.預防試驗錶明:esat6-卡介苗重組疫苗組、卡介苗組與生理鹽水對照組比都能延長結覈分枝桿菌感染小鼠的半數死亡時間,降低2箇月內的死亡率.其中esat6-卡介苗重組疫苗組效果顯著,與卡介苗組比有顯著差異.結覈分支桿菌攻擊後2箇月,處死小鼠時,小鼠髒器大體病變及髒器培養結果錶明:esat6-卡介苗重組疫苗免疫組小鼠比其他各組小鼠結覈菌的負荷輕.抗體檢測結果及淋巴細胞增殖實驗各組結果差異無統計學意義.結論 正確構建瞭esat6-卡介苗重組疫苗,esat6-卡介苗重組疫苗能提高卡介苗對結覈分枝桿菌感染的預防作用.
목적 구건결핵분지간균esat6-잡개묘중조역묘,연구기면역원성급항결핵작용,이기획득결핵병예방성혹치료성역묘.방법 통과기인공정중조기술장결핵분지간균보호성항원esat6적편마기인여천사질립재체pYUB295중조,채용전천공기술도입잡개묘중,응용취합매련반응(PCR)확증、취병희선알응알전영(PAGE)감정중조잡개묘.통과매련면역흡부시험(ELISA)법검측기혈청중특이성항체,용MTS법분석기비림파세포증식지수.통과관찰esat6-잡개묘중조역묘대결핵분지간균감염적예방시험중실험동물반수사망시간、일정시간내적사망솔、대체병변、T세포급B세포면역공능등지표평개esat6-잡개묘중조역묘대결핵분지간균감염적예방효과.결과 PCR확증、한제성내절매매절、DNA측서감정、PAGE전영표명성공지구건료esat6기인pYUB295중조질립,ESAT6단백재잡개묘중분비표체.중조잡개묘면역원성시험표명:esat6-잡개묘중조역묘조유ESAT6특이성항체산생,45 d시체도최고수평.비림파세포증식시험표명각조자격지수균체2.0이상,esat6중조잡개묘면역조소서비림파세포적자격지수초고우대조조.예방시험표명:esat6-잡개묘중조역묘조、잡개묘조여생리염수대조조비도능연장결핵분지간균감염소서적반수사망시간,강저2개월내적사망솔.기중esat6-잡개묘중조역묘조효과현저,여잡개묘조비유현저차이.결핵분지간균공격후2개월,처사소서시,소서장기대체병변급장기배양결과표명:esat6-잡개묘중조역묘면역조소서비기타각조소서결핵균적부하경.항체검측결과급림파세포증식실험각조결과차이무통계학의의.결론 정학구건료esat6-잡개묘중조역묘,esat6-잡개묘중조역묘능제고잡개묘대결핵분지간균감염적예방작용.
