中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2011年
4期
253-256
,共4页
游莉%徐兰兰%郭元元%邹正渝%黎玉叶%孙双双%罗进勇%周兰
遊莉%徐蘭蘭%郭元元%鄒正渝%黎玉葉%孫雙雙%囉進勇%週蘭
유리%서란란%곽원원%추정투%려옥협%손쌍쌍%라진용%주란
GST-hS100A9融合蛋白%诱导表达%蛋白纯化%蛋白鉴定
GST-hS100A9融閤蛋白%誘導錶達%蛋白純化%蛋白鑒定
GST-hS100A9융합단백%유도표체%단백순화%단백감정
目的:制备GST-hS100A9融合蛋白.方法:从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(Gs4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用.结果:经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖.结论:成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用.
目的:製備GST-hS100A9融閤蛋白.方法:從pHAHA-hS100A9中PCR擴增穫取hS100A9基因,亞剋隆至原覈錶達載體pGST-moluc,構建pGST-hS100A9;後者轉化BL21菌後,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導重組菌錶達融閤蛋白GST-hS100A9,經穀胱甘肽-瓊脂糖4B毬珠(Gs4BB)分離純化、SDS-PAGE及Western blot鑒定,BCA法蛋白定量,CCK-8測定GST-hS100A9對乳腺癌細胞MCF-7增殖的作用.結果:經酶切、測序分析證實pGST-hS100A9質粒構建正確;重組菌株經IPTG誘導後,錶達相對分子質量約36000的蛋白;純化後純度達94%;該蛋白可被S100A9的抗體特異識彆;該蛋白產量約為20mg/L菌液;且其抑製MCF-7的增殖.結論:成功構建GST-hS100A9融閤蛋白的原覈錶達質粒pGST-hS100A9;該質粒可在BL21中誘導錶達GST-hS100A9,產率高,且對MCF-7增殖有抑製作用.
목적:제비GST-hS100A9융합단백.방법:종pHAHA-hS100A9중PCR확증획취hS100A9기인,아극륭지원핵표체재체pGST-moluc,구건pGST-hS100A9;후자전화BL21균후,이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도중조균표체융합단백GST-hS100A9,경곡광감태-경지당4B구주(Gs4BB)분리순화、SDS-PAGE급Western blot감정,BCA법단백정량,CCK-8측정GST-hS100A9대유선암세포MCF-7증식적작용.결과:경매절、측서분석증실pGST-hS100A9질립구건정학;중조균주경IPTG유도후,표체상대분자질량약36000적단백;순화후순도체94%;해단백가피S100A9적항체특이식별;해단백산량약위20mg/L균액;차기억제MCF-7적증식.결론:성공구건GST-hS100A9융합단백적원핵표체질립pGST-hS100A9;해질립가재BL21중유도표체GST-hS100A9,산솔고,차대MCF-7증식유억제작용.
