茶叶科学
茶葉科學
다협과학
2012年
3期
269-275
,共7页
王乃栋%张丽霞%黄晓琴%韩晓阳%李智
王迺棟%張麗霞%黃曉琴%韓曉暘%李智
왕내동%장려하%황효금%한효양%리지
茶树%多酚氧化酶%融合蛋白真核表达载体%巴斯德毕赤酵母%诱导表达
茶樹%多酚氧化酶%融閤蛋白真覈錶達載體%巴斯德畢赤酵母%誘導錶達
다수%다분양화매%융합단백진핵표체재체%파사덕필적효모%유도표체
以迎霜品种茶树基因组为模板,利用高保真聚合酶pfu,通过PCR方法扩增得到茶树PPO基因的编码区序列.通过设计酶切引物将其成功融合至真核表达载体pPICZa中,构建出茶多酚氧化酶的融合蛋白真核表达载体pPICZa-PPO,并将其转化进入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115中,成功筛选出多个阳性转化子.对阳性转化子进行甲醇诱导,采用Western-Blotting方法在培养液中成功检测到诱导表达的目的蛋白.酶活检测结果也显示诱导产物具有较高的相对酶活性,能够正确发挥酶蛋白的生物功能.
以迎霜品種茶樹基因組為模闆,利用高保真聚閤酶pfu,通過PCR方法擴增得到茶樹PPO基因的編碼區序列.通過設計酶切引物將其成功融閤至真覈錶達載體pPICZa中,構建齣茶多酚氧化酶的融閤蛋白真覈錶達載體pPICZa-PPO,併將其轉化進入巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris) GS115中,成功篩選齣多箇暘性轉化子.對暘性轉化子進行甲醇誘導,採用Western-Blotting方法在培養液中成功檢測到誘導錶達的目的蛋白.酶活檢測結果也顯示誘導產物具有較高的相對酶活性,能夠正確髮揮酶蛋白的生物功能.
이영상품충다수기인조위모판,이용고보진취합매pfu,통과PCR방법확증득도다수PPO기인적편마구서렬.통과설계매절인물장기성공융합지진핵표체재체pPICZa중,구건출다다분양화매적융합단백진핵표체재체pPICZa-PPO,병장기전화진입파사덕필적효모(Pichia pastoris) GS115중,성공사선출다개양성전화자.대양성전화자진행갑순유도,채용Western-Blotting방법재배양액중성공검측도유도표체적목적단백.매활검측결과야현시유도산물구유교고적상대매활성,능구정학발휘매단백적생물공능.
