中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2004年
2期
150-154
,共5页
周丽君%王琰%王堃%陈晓穗%张海荣%张达衿%俞莉章
週麗君%王琰%王堃%陳曉穗%張海榮%張達衿%俞莉章
주려군%왕염%왕곤%진효수%장해영%장체금%유리장
噬菌体抗体库%鼠单抗人源化%loxp-cre重组系统%膀胱癌
噬菌體抗體庫%鼠單抗人源化%loxp-cre重組繫統%膀胱癌
서균체항체고%서단항인원화%loxp-cre중조계통%방광암
目的构建含鼠单抗CDR3的人源噬菌体抗体库,对膀胱癌鼠单抗进行人源化. 方法通过重叠PCR及DNA重组技术,将抗膀胱癌鼠单抗BDI的CDR3区与人淋巴细胞来源的多样化的VH和Vκ组合,构建含BDI CDR3的人源噬菌体抗体库;利用loxp-cre定位重组系统,增加轻、重链的组合配对,获大容量抗体库;用膀胱癌细胞(EJ)从中筛选人源化抗膀胱癌单抗Fab段,ELISA方法对所筛克隆进行特异性鉴定,同时运用竞争抑制实验对所筛特异性克隆进行抗原表位的核实. 结果首先构建了库容为2×107的含鼠CDR3区的人源噬菌体抗体库;经过在cre+细菌胞内的定位重组后,获得库容为1010的大容量噬菌体抗体库;用EJ细胞筛选到可与其特异结合的人源性Fab段;竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源单抗结合同一抗原表位. 结论在没有亲本鼠单抗基因,仅了解其CDR3序列的条件下,可通过CDR3导向,构建大容量抗体库,筛选到相应的人源化抗体基因.
目的構建含鼠單抗CDR3的人源噬菌體抗體庫,對膀胱癌鼠單抗進行人源化. 方法通過重疊PCR及DNA重組技術,將抗膀胱癌鼠單抗BDI的CDR3區與人淋巴細胞來源的多樣化的VH和Vκ組閤,構建含BDI CDR3的人源噬菌體抗體庫;利用loxp-cre定位重組繫統,增加輕、重鏈的組閤配對,穫大容量抗體庫;用膀胱癌細胞(EJ)從中篩選人源化抗膀胱癌單抗Fab段,ELISA方法對所篩剋隆進行特異性鑒定,同時運用競爭抑製實驗對所篩特異性剋隆進行抗原錶位的覈實. 結果首先構建瞭庫容為2×107的含鼠CDR3區的人源噬菌體抗體庫;經過在cre+細菌胞內的定位重組後,穫得庫容為1010的大容量噬菌體抗體庫;用EJ細胞篩選到可與其特異結閤的人源性Fab段;競爭抑製實驗錶明所穫人源抗體片段與親本鼠源單抗結閤同一抗原錶位. 結論在沒有親本鼠單抗基因,僅瞭解其CDR3序列的條件下,可通過CDR3導嚮,構建大容量抗體庫,篩選到相應的人源化抗體基因.
목적구건함서단항CDR3적인원서균체항체고,대방광암서단항진행인원화. 방법통과중첩PCR급DNA중조기술,장항방광암서단항BDI적CDR3구여인림파세포래원적다양화적VH화Vκ조합,구건함BDI CDR3적인원서균체항체고;이용loxp-cre정위중조계통,증가경、중련적조합배대,획대용량항체고;용방광암세포(EJ)종중사선인원화항방광암단항Fab단,ELISA방법대소사극륭진행특이성감정,동시운용경쟁억제실험대소사특이성극륭진행항원표위적핵실. 결과수선구건료고용위2×107적함서CDR3구적인원서균체항체고;경과재cre+세균포내적정위중조후,획득고용위1010적대용량서균체항체고;용EJ세포사선도가여기특이결합적인원성Fab단;경쟁억제실험표명소획인원항체편단여친본서원단항결합동일항원표위. 결론재몰유친본서단항기인,부료해기CDR3서렬적조건하,가통과CDR3도향,구건대용량항체고,사선도상응적인원화항체기인.
