中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2006年
7期
456-460
,共5页
余海青%纪春岩%马道新%臧绍蕾
餘海青%紀春巖%馬道新%臧紹蕾
여해청%기춘암%마도신%장소뢰
RNA干扰%基因,mdr1%基因,mcl1%细胞株,K562/A02%抗药性,多药
RNA榦擾%基因,mdr1%基因,mcl1%細胞株,K562/A02%抗藥性,多藥
RNA간우%기인,mdr1%기인,mcl1%세포주,K562/A02%항약성,다약
目的构建针对mdr1和mcl1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰表达质粒,并探讨联合转染对K562/A02细胞耐药的逆转作用.方法根据mdr1和mcl1基因表达序列设计有效的RNA干扰片段,分别将其构建入质粒表达空载体中,以获得两种基因特异性shRNA干扰表达质粒;然后在脂质体介导下分别和联合转染K562/A02细胞,用G418和(或)Hygro B筛选出稳定表达的细胞克隆.用RT-PCR分析mdr1和mcl1 mRNA的表达;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术测定细胞P-糖蛋白表达水平以及细胞凋亡率.结果成功构建两个基因的shRNA干扰表达质粒.mdr1、mcl1 shRNA干扰表达质粒单独和联合转染K562/A02细胞可有效封闭相应基因表达,联合转染组mdr1基因和mcl1基因的mRNA相对表达水平分别是未转染细胞的52%,44%.mdr1、mcl1 shRNA干扰表达质粒单独和联合转染后K562/A02细胞耐药逆转率分别为63.8%,71.1%,83.1%,转染两种质粒组对K562/A02细胞耐药逆转率最高,P糖蛋白相对表达量由未转染组的19.70±1.15降至6.40±0.92(P《0.01),阿霉素诱导的细胞凋亡率由(1.53±0.42)%提高至(7.77±0.42)%(P《0.01).联合转染两种质粒组和单独转染组比较,细胞对阿霉素敏感性和阿霉素诱导的细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P《0.05).结论转染mdr1或mcl1基因的shRNA干扰表达质粒可有效抑制相应基因表达,皆不同程度逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性;联合转染两种质粒可显著增加逆转耐药的效果.mcl1基因可能与K562/A02耐药相关.
目的構建針對mdr1和mcl1基因的短髮夾RNA(shRNA)榦擾錶達質粒,併探討聯閤轉染對K562/A02細胞耐藥的逆轉作用.方法根據mdr1和mcl1基因錶達序列設計有效的RNA榦擾片段,分彆將其構建入質粒錶達空載體中,以穫得兩種基因特異性shRNA榦擾錶達質粒;然後在脂質體介導下分彆和聯閤轉染K562/A02細胞,用G418和(或)Hygro B篩選齣穩定錶達的細胞剋隆.用RT-PCR分析mdr1和mcl1 mRNA的錶達;MTT法檢測阿黴素對K562/A02細胞的半數抑製濃度(IC50);流式細胞術測定細胞P-糖蛋白錶達水平以及細胞凋亡率.結果成功構建兩箇基因的shRNA榦擾錶達質粒.mdr1、mcl1 shRNA榦擾錶達質粒單獨和聯閤轉染K562/A02細胞可有效封閉相應基因錶達,聯閤轉染組mdr1基因和mcl1基因的mRNA相對錶達水平分彆是未轉染細胞的52%,44%.mdr1、mcl1 shRNA榦擾錶達質粒單獨和聯閤轉染後K562/A02細胞耐藥逆轉率分彆為63.8%,71.1%,83.1%,轉染兩種質粒組對K562/A02細胞耐藥逆轉率最高,P糖蛋白相對錶達量由未轉染組的19.70±1.15降至6.40±0.92(P《0.01),阿黴素誘導的細胞凋亡率由(1.53±0.42)%提高至(7.77±0.42)%(P《0.01).聯閤轉染兩種質粒組和單獨轉染組比較,細胞對阿黴素敏感性和阿黴素誘導的細胞凋亡率差異亦有統計學意義(P《0.05).結論轉染mdr1或mcl1基因的shRNA榦擾錶達質粒可有效抑製相應基因錶達,皆不同程度逆轉K562/A02細胞對阿黴素的耐藥性;聯閤轉染兩種質粒可顯著增加逆轉耐藥的效果.mcl1基因可能與K562/A02耐藥相關.
목적구건침대mdr1화mcl1기인적단발협RNA(shRNA)간우표체질립,병탐토연합전염대K562/A02세포내약적역전작용.방법근거mdr1화mcl1기인표체서렬설계유효적RNA간우편단,분별장기구건입질립표체공재체중,이획득량충기인특이성shRNA간우표체질립;연후재지질체개도하분별화연합전염K562/A02세포,용G418화(혹)Hygro B사선출은정표체적세포극륭.용RT-PCR분석mdr1화mcl1 mRNA적표체;MTT법검측아매소대K562/A02세포적반수억제농도(IC50);류식세포술측정세포P-당단백표체수평이급세포조망솔.결과성공구건량개기인적shRNA간우표체질립.mdr1、mcl1 shRNA간우표체질립단독화연합전염K562/A02세포가유효봉폐상응기인표체,연합전염조mdr1기인화mcl1기인적mRNA상대표체수평분별시미전염세포적52%,44%.mdr1、mcl1 shRNA간우표체질립단독화연합전염후K562/A02세포내약역전솔분별위63.8%,71.1%,83.1%,전염량충질립조대K562/A02세포내약역전솔최고,P당단백상대표체량유미전염조적19.70±1.15강지6.40±0.92(P《0.01),아매소유도적세포조망솔유(1.53±0.42)%제고지(7.77±0.42)%(P《0.01).연합전염량충질립조화단독전염조비교,세포대아매소민감성화아매소유도적세포조망솔차이역유통계학의의(P《0.05).결론전염mdr1혹mcl1기인적shRNA간우표체질립가유효억제상응기인표체,개불동정도역전K562/A02세포대아매소적내약성;연합전염량충질립가현저증가역전내약적효과.mcl1기인가능여K562/A02내약상관.
