中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2005年
1期
9-12
,共4页
陈芳%刘惠莉%孙红立%曹祥荣%李震%赵立平
陳芳%劉惠莉%孫紅立%曹祥榮%李震%趙立平
진방%류혜리%손홍립%조상영%리진%조립평
TGEV%PEDV%多重RT-PCR%检测
TGEV%PEDV%多重RT-PCR%檢測
TGEV%PEDV%다중RT-PCR%검측
为了检测、区分猪传染性胃肠炎(TGE)和猪流行性腹泻(PED),建立了同时检测这2种疾病病原体的多重PCR方法.参考GenBank登录的TGEV和PEDV纤突蛋白S基因序列,经DNAsis 2.0比较分析,分别筛选出TGEV、PEDV S基因相对保守区.以TGEV TH-98株(GenBank登陆号为AF494337)和PEDV CV777株(GenBank登陆号为NC003436)为参考模板,利用软件Primer 3设计合成了2对寡核苷酸引物,以ST细胞培养的TGEV和PEDV毒株核酸为模板,利用所设计的2对引物进行多重RT-PCR扩增,结果同时得到与试验设计相符的499 bp(TGEV)和199 bp(PEDV)的扩增条带,而对其他3种猪病原的扩增结果均为阴性.敏感性试验结果表明,建立的多重RT-PCR方法可检测出10pgTGEV RNA和100pgPEDV RNA.
為瞭檢測、區分豬傳染性胃腸炎(TGE)和豬流行性腹瀉(PED),建立瞭同時檢測這2種疾病病原體的多重PCR方法.參攷GenBank登錄的TGEV和PEDV纖突蛋白S基因序列,經DNAsis 2.0比較分析,分彆篩選齣TGEV、PEDV S基因相對保守區.以TGEV TH-98株(GenBank登陸號為AF494337)和PEDV CV777株(GenBank登陸號為NC003436)為參攷模闆,利用軟件Primer 3設計閤成瞭2對寡覈苷痠引物,以ST細胞培養的TGEV和PEDV毒株覈痠為模闆,利用所設計的2對引物進行多重RT-PCR擴增,結果同時得到與試驗設計相符的499 bp(TGEV)和199 bp(PEDV)的擴增條帶,而對其他3種豬病原的擴增結果均為陰性.敏感性試驗結果錶明,建立的多重RT-PCR方法可檢測齣10pgTGEV RNA和100pgPEDV RNA.
위료검측、구분저전염성위장염(TGE)화저류행성복사(PED),건립료동시검측저2충질병병원체적다중PCR방법.삼고GenBank등록적TGEV화PEDV섬돌단백S기인서렬,경DNAsis 2.0비교분석,분별사선출TGEV、PEDV S기인상대보수구.이TGEV TH-98주(GenBank등륙호위AF494337)화PEDV CV777주(GenBank등륙호위NC003436)위삼고모판,이용연건Primer 3설계합성료2대과핵감산인물,이ST세포배양적TGEV화PEDV독주핵산위모판,이용소설계적2대인물진행다중RT-PCR확증,결과동시득도여시험설계상부적499 bp(TGEV)화199 bp(PEDV)적확증조대,이대기타3충저병원적확증결과균위음성.민감성시험결과표명,건립적다중RT-PCR방법가검측출10pgTGEV RNA화100pgPEDV RNA.
