CAJ | 학술논문

目的为初步探讨中药青光安含药血清对体外培养视网膜神经节细胞(RGCs)的作用机制和为中药对青光眼的体外疗效研究提供一种新的研究方法.方法:不同浓度青光安颗粒剂和益脉康片剂给3月龄SD大鼠灌胃,获取不同含药浓度的大鼠血清;建立视网膜神经节细胞纯化培养的常压和高压模型,并用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞百分率;利用流式细胞仪进行细胞凋亡中Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的检查.结果:成功获取中药的含药血清,并将其用于视网膜神经节细胞的体外培养;成功分离并培养了视网膜神经节细胞纯化培养模型,RGCs的混合培养最长可存活3～6周,RGCs的纯化培养可存活时间4～7天;成功对纯化培养的细胞进行压力造模.压力20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg,加压时间1～4小时均能促进RGCs的凋亡,其凋亡细胞的数目以80mmHg、4小时为最多(P＜0.01).含药血清作用于纯化培养的视网膜神经节细胞后,Bcl-2的表达随青光安含药浓度的增高而增高,Bax的表达随青光安含药浓度的增高而降低.结论:压力能促进RGCs的凋亡,其凋亡细胞的数目随压力的增大、加压时间的延长而增加;青光安含药血清能延缓RGCs的凋亡,对其有保护作用;利用含药血清对体外培养的细胞进行试验,是中药药效试验的重要方法之一.
목적위초보탐토중약청광안함약혈청대체외배양시망막신경절세포(RGCs)적작용궤제화위중약대청광안적체외료효연구제공일충신적연구방법.방법:불동농도청광안과립제화익맥강편제급3월령SD대서관위,획취불동함약농도적대서혈청;건립시망막신경절세포순화배양적상압화고압모형,병용류식세포의(FCM)검측조망세포백분솔;이용류식세포의진행세포조망중Bcl-2、Bax등조망단백적검사.결과:성공획취중약적함약혈청,병장기용우시망막신경절세포적체외배양;성공분리병배양료시망막신경절세포순화배양모형,RGCs적혼합배양최장가존활3～6주,RGCs적순화배양가존활시간4～7천;성공대순화배양적세포진행압력조모.압력20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg,가압시간1～4소시균능촉진RGCs적조망,기조망세포적수목이80mmHg、4소시위최다(P＜0.01).함약혈청작용우순화배양적시망막신경절세포후,Bcl-2적표체수청광안함약농도적증고이증고,Bax적표체수청광안함약농도적증고이강저.결론:압력능촉진RGCs적조망,기조망세포적수목수압력적증대、가압시간적연장이증가;청광안함약혈청능연완RGCs적조망,대기유보호작용;이용함약혈청대체외배양적세포진행시험,시중약약효시험적중요방법지일.